Как правильно развести протеин: Как разводить протеин??? — fight-space.ru

Как разводить протеин с водой или молоком

Протеин — самая популярная пищевая добавка среди атлетов силовых видов спорта. А в бодибилдинге употребление такого коктейля так же обязательно, как и регулярные силовые тренировки.

С применением этой добавки связано много вопросов. Сегодня расскажем об одном из самых простых — как разводить протеин.

Правила разведения протеина

Казалось бы, что может быть проще – развести порошок жидкостью и выпить. Но в этом деле есть несколько нюансов, незнание которых приведет к снижению эффекта от добавки.

Далее подробно разберемся, как правильно разводить протеин так, чтобы получить от него максимум пользы.

Вариант 1: На воде

Для начала расскажем о том, как разводить протеин с водой.

Для этого используется чистая питьевая вода комнатной температуры.

Горячую воду для размешивания применять категорически нельзя, так как при нагревании белка до 70°С происходит процесс его денатурации — разрушения молекулярной структуры.

Применение холодной воды также нежелательно. При низких температурах порошок плохо и достаточно долго растворяется.

Чтобы приготовить протеиновый коктейль, как правило, используют следующие пропорции: 200-300 мл воды на 1 мерную ложку продукта.

У каждого производителя свой объем мерной ложки, который может значительно отличаться по размеру от других фирм.

У большинства это 23-25 грамм белка. Как правило, она находится внутри упаковки.

Если вы захотите увеличить количество белка в коктейле, используйте 1.5-2 ложки порошка. Соответственно увеличив и количество воды на порцию.

Бывают случаи, когда порошок разводят только водой и ничем другим. Это касается применения сывороточного вида, когда необходимо закрыть белковое окно и обеспечить быстрое поступление белка в мышечные клетки.

Остальные жидкости будут дольше перевариваться, а значит, усвоение замедлится.

Два самых важных белковых окна – сразу по окончании силовой тренировки и утром, после пробуждения. Если сывороточный протеин принимается в эти периоды, порошок смешивают только с водой.

Вариант 2: На молоке

В принципе, здесь рекомендации о том, как размешивать протеин, такие же – желательно молоко комнатной температуры.

В зависимости от целей тренировок используется обезжиренное молоко при наборе сухой мышечной массы или первой фазе работы на рельеф.

Либо молоко максимальной жирности при тренировках на массе, чтобы увеличить калорийность напитка.

Вариант 3: На соке

О том, как разводить протеин с водой и молоком, разобрались. Два этих способа относятся к традиционным вариантам.

А вот замешивание на соке – больше экзотика, которая теоретически возможна, но на практике редко кем применяется.

Практически на каждой банке или пакете с протеином написано, что его можно разводить водой, молоком или соком. И, наверное, каждый, кто регулярно принимает белковые коктейли, хоть раз, но пробовал пить их на соке.

Однако после больше не повторял эту затею. И на это есть ряд объективных причин:

1. Получается очень сладко

Большинство белковых добавок – это достаточно сладкие порошковые концентраты, рассчитанные на разведение водой или молоком.

В итоге коктейль получается умеренно сладким. А вот на соке – чересчур.

2. Консистенция напитка

Она бывает достаточно своеобразная, как бы с хлопьями.

Особенно, если для размешивания выбирают соки из цитрусовых. Например, апельсиновый или лимонный. Они способствуют свертыванию белка.

3. Большое количество углеводов

К порции, помимо 4-6 грамм “родных” углеводов из порошкового протеина, благодаря соку добавляется еще 30-40 грамм. Всего получается 35-45 грамм. И это все быстрые углеводы, несущие мало пользы для организма.

Если ваш тип телосложения эктоморфный (худощавый, тяжело набирающий вес), такое их количество все же будет на руку. Поскольку главная цель тренировок эктоморфов — набор веса практически любой ценой, и чем больше калорий они получат, тем лучше.

Во всех остальных случаях регулярное потребление такого количество сахара может спровоцировать отложение подкожного жира.

О разведении в шейкере

Как правило, протеин разводят двумя способами – в электромиксере или в шейкере.

С миксером все понятно — налил жидкость, насыпал порцию порошка, нажал на кнопку, взбил и выпил. А вот разводить протеин в шейкере немного сложнее.

Вначале в шейкер наливается жидкость, примерно до половины объема. Далее засыпается протеин.

Шейкер плотно закрывается и коктейль взбивается вручную с помощью интенсивных потряхиваний.

Продолжительность взбивания зависит от состава порошка. Иногда хватит 1 минуты, иногда потребуется 2-3.

Далее шейкер открывается, и если напиток получился слишком густой, добавляется необходимое количество жидкости.

После применения шейкер нужно разобрать и как можно скорее тщательно вымыть.

В противном случае он быстро приобретет неприятный, гнилостный запах. Это объясняется тем, что белок – это отличная среда для размножения бактерий, которые и дают плохой аромат.

Можно ли носить с собой готовый напиток

Конечно, удобно сделать пару порций протеина на день и пить тогда, когда надо, не теряя времени на разведение. Поэтому вопрос о том, можно ли так делать, актуален для многих.

Заранее протеин разводить можно. Но, к сожалению, срок годности в готовом виде у такого продукта — всего пара часов.

Поэтому, если вы собираетесь носить с собой шейкер с приготовленной смесью весь день (особенно в теплое время года), к вечеру он скорее всего испортится.

Сроки хранения готового коктейля

Сроки хранения протеина в готовом виде – 1-2 при комнатной температуре.

Летом, в жаркую погоду, и того меньше. В холодильнике готовый напиток сохраняется до 5 часов.

Как видите, сроки небольшие. Это связано с биологической активностью белка, в котором быстро размножаются бактерии.

К тому же многие протеины содержат в составе другие вещества, например, витамины или ферменты, у которых активный период в жидкой среде еще короче.

Поэтому самый подходящий вариант приема — употребление коктейля сразу после приготовления.

Для случаев, когда носить добавку с собой надо продолжительное время, производители спортивного питания придумали жидкую форму. Это белковый напиток уже в готовом виде, который находится в бутылке (одна порция – одна бутылка).

В запечатанном виде срок хранения жидкого протеина – 1 месяц. После вскрытия срок годности такой же, как и у порошковых коктейлей.

Заключение

Надеемся, теперь вам понятно с чем пить протеин, как его разводить и сколько он хранится в готовом виде.

В зависимости от поставленных целей и типа телосложения, порошок размешивается с водой, молоком и даже соком.

Комбинируйте регулярные силовые тренировки и прием белковых коктейлей и ваши мышцы с благодарностью отзовутся ускорением роста объемов и силовых показателей.

5 2 голоса

Рейтинг статьи

Как правильно разводить протеин | Proka4aem.ru

Как разводить протеин, чтобы он максимально усвоился? Необходимо точно соблюсти пропорции «порошок/жидкость», и не использовать жидкости, которые не указал в качестве допустимых производитель. Например, некоторые протеиновые смеси прекрасно разводятся и в воде, и в молоке, и в соке, а некоторые требуют разведения только в подогретом обезжиренном молоке или только в мягкой теплой воде. Определяется это в первую очередь составом самого коктейля. Например, если в нем есть крупного помола креатин, растворить коктейль в холодной воде до приемлемого по вкусу однородного состояния практически невозможно.

Важно также правильно подобрать способ взбивания. Перед тем, как разводить протеин в шейкере, убедитесь, что производитель предусмотрел такую возможность! Некоторые смеси допускают смешивание в ручном шейкере (хотя это все равно будет неслабая дополнительная тренировочка на бицепс, трицепс и их мышцы-синергисты). Другие смеси — и это всегда указано на упаковке! — требуют применять электромиксер или блендер. Чтобы все их ингредиенты набухли и растворились, равномерно распределились в пене, им нужно продолжительное время взбивания.

Можно ли разводить протеин в соке? Это допускают лишь некоторые рецептуры, как правило, не включающие в свой состав молочный белок. Либо получается очень интересная консистенция — с хлопьями. На вкус будет все равно неплохо, так что если первый эксперимент удался, и протеин все же растворился, как смог, это хороший способ разнообразить питание.

Содержание

• Правила разведения протеина
  • Как разводить протеин с водой
  • Как разводить протеин с молоком
  • Как правильно разводить протеин в шейкере
• Сколько хранится разведенный протеин?
• Как разводить протеин — пропорции, особенности, лайфхаки

Правила разведения протеина

Основное правило — точно отмерить компоненты, соблюсти температуру жидкости, всыпать порошок в жидкость и взбивать ДОЛГО! Ну не меньше 10 минут, как минимум, в ручном шейкере, и 5 минут в миксере. После каждого смешивания коктейля емкость и смешивающие элементы (и особенно пружинящий шарик шейкера) необходимо тщательно мыть и сушить: микробы считают протеиновые коктейли прекрасной питательной средой и начинают развиваться на стенках невымытой чаши миксера буквально сразу же. Остатки молочного жира, прогоркая и пропитывая своим запахом пластик, тоже могут серьёзно испортить впечатление от последующих порций.

Шейкер, в котором приготавливается и хранится молочный коктейль, необходимо регулярно стерилизовать. Если вы планируете брать с собой уже разведенный коктейль и хранить его в шейкере несколько часов, его стакан должен быть изготовлен строго из полипропилена! Только этот пластик выдерживает кипячение, абсолютно безвреден для нашего организма и практически не впитывает в себя жир.

Как разводить протеин с водой

Обычно в воде разводят протеин в период сушки, если у спортсмена непереносимость лактозы либо он вегетарианец. Существуют специальные смеси, которые разводятся исключительно в воде, при этом они неплохо миксуются и в ручном шейкере. Порошок протеина всегда засыпают в уже отмеренную теплую воду. Можно ли разводить протеин горячей водой? Да, можно, но, разумеется, не кипящей, а с температурой не более 60 градусов Цельсия. В холодной воде протеин растворяется хуже, чем в теплой. В слишком горячей воде белок денатурирует, «заваривается».

Обычные «молочные» смеси в воде разводятся плохо, дают некоторую потерю в белке, слишком резкий вкус (поскольку именно молоко его смягчает) и хуже набухают. Они практически не растворяются при ручном взбалтывании в шейкере. Поэтому лучше обычный «молочно-растворяемый» протеин с водой не миксовать, либо увеличивать время взбивания и использовать только электромиксер.

Много спорят и о том, в какой воде разводить протеин. Если есть возможность, это надо делать в теплой родниковой, питьевой слабоминерализованной либо теплой водопроводной воде, прошедшей очистку обычными (не мембранными и не осмотическими) фильтрами.

Вода, прошедшая очистку в осмотических фильтрах — дистиллированная, в ней нет минеральных солей, и для спортсмена это практически яд. Необходимо помнить, что мы получаем с питьевой водой 30% солей кальция, магния, калия и фосфора, необходимых нам для жизни (и тем более для тренировки, которая приводит к повышенным тратам электролитов, уходящих с потом).

Как разводить протеин с молоком

В шейкер или миксер сперва заливают молоко (желательно охлажденное), затем высыпают порошок протеина или гейнера и включают миксер на слабые обороты. Не наоборот! Еще хуже, когда смесь протеина высыпают в мокрый миксер и лишь потом заливают молоко, а миксер сразу включают на высокую скорость. В этом случае порошок комкуется, прилипает к стенкам, и половину белка из порции вы потеряете, даже если будете взбивать смесь вдвое дольше.

Как правильно разводить протеин в шейкере

В шейкер наливают жидкость (не более половины объема), помещают в неё взбивающий элемент (пружину, сфероид и т.д.), засыпают порошок и, закрыв крышку, взбалтывают — сперва легкими круговыми движениями, распределяя порошок в объеме жидкости и перемешивая, затем увеличивают амплитуду, интенсивность и скорость движений.

Попытка сразу применить максимальные амплитуды приведет к тому, что порошок слипнется в комочки или прилипнет к стенкам. Кроме того, всегда есть риск, что крышка неплотно закрыта…

Сколько хранится разведенный протеин?

В среднем производители указывают, что разведенный протеин можно хранить несколько часов, в основном это зависит от жидкости, на которой производилось разведение, от температуры воздуха и от условий приготовления: микробиологической чистоты посуды, рук и воздуха в помещении, где отмеривали продукты. Молоко, даже стерилизованное, в коктейле очень быстро скисает без холодильника, и хранить его больше 2-3-х часов нерационально. В сущности, периода «жизни» разведенного коктейля хватает на время тренировки, чтобы можно было половину коктейля выпить до, а половину — после неё.

Коктейли, разведенные на холодной воде или соке с естественными консервантами, можно хранить до 10 часов. Микробиологическая порча в них начинается не так быстро, как в молочных, но они сильнее расслаиваются и требуют дополнительного взбивания перед употреблением. Что намного хуже, в них идет разрушение белка. Даже если напиток и останется безопасным, для здоровья, он может потерять свои специальные свойства. А тогда предварительное разведение становится бессмысленной тратой денег.

Хранить разведенный коктейль — не самый лучший вариант, в идеале белковый коктейль разводят непосредственно перед употреблением, именно на этом и настаивают производители. Поэтому, если приходится готовить напиток заранее, желательно уточнить у производителя, сколько можно хранить разведенный протеин конкретной марки и в каких условиях.

Как разводить протеин — пропорции, особенности, лайфхаки

Размер порции в граммах все производители задают разный. Чтобы из разного количества сухой смеси, обладающей различным свойствами, получился приятный по консистенции напиток, требуется, разумеется, разное количество жидкости. Как правило, протеин разводить водой или молоком нужно в пропорции 1:5 или 1:8, т.е. в 150, 200 или 250 мл жидкости (причем обычно в качестве идеальной базы производитель предусматривает применение обезжиренного молока или обрата).

Если коктейль разводится молоком, белки и витамины молока будут учитываться в общей белковой сумме напитка (например, 25 граммов сухой смеси плюс 5-6 граммов белка из жидкого молока дадут искомые 30-31 грамм белка на готовую порцию напитка).

Увеличивая или уменьшая объем жидкости, изменяя жирность молока или густоту сока (например, добавляя фруктовое пюре) можно добиваться различной консистенции и корректировать вкус. Опыт показывает, что протеины Р-лайн, например, чуть более вкусны и лучше взбиваются, если норма молока завышается на 10%. Причем порция получается в полтора раза больше по объему за счет интенсивного вспенивания. Коктейли марки Оптимум слишком резкие по вкусу, его тоже можно смягчить добавкой 10-15% молока или банана (изменится калорийность!).

А вот смеси марки Пауэр резко теряют во вкусе и консистенции, если взять больше жидкости. Да они и сами по себе жидковаты и почти не пенятся, даже с указанной производителем нормой молока (поэтому его часто берут меньше или добавляют немного яичного белка, либо 5-6 граммов хорошо пенящегося протеина другой марки).

Добавляя в смесь различные ингредиенты и изменяя количество жидкости, можно изменять вкус и консистенцию покупного протеинового коктейля или трансформировать его в ристор или гейнер.

Хотя жидкие напитки быстрее усваиваются организмом, чем густые, протеиновую смесь вовсе не обязательно употреблять в виде коктейля. Замешав её в небольшом количестве молока, сливок или сметаны, можно получить оригинальную массу для десертного бутерброда, соус к блинчикам или добавку к утренней овсянке. Несладкие и нейтрального вкуса протеиновые смеси часто добавляют в первые и вторые блюда, в соусы и омлеты, обогащая их белком

Тут важен эксперимент и личный вкус: насколько разводить протеин, каждый спортсмен решает сам, исходя, в том числе, и из своих потребностей в питье и белке. Пропорции и рецептуры надо подбирать под себя лично, а марки спортпита регулярно менять, чтобы организм получал разные по аминокислотному составу белки. Тогда спортпит никогда не надоест.

Предыдущая

Спортивное питаниеСпортивное питание для сжигания жира

Следующая

Спортивное питаниеДля чего нужен гейнер: всё, что нужно знать начинающему бодибилдеру

Руководство по подготовке проб для вестерн-блоттинга

США

Вестерн-блоттинг (ВБ) — это широко используемый метод определения экспрессии белка в клетках и тканях. Первым шагом в процедуре WB является подготовка лизата ткани или клеток. Выбор правильных буферов и условий работы являются ключевыми шагами в обеспечении успеха эксперимента.

Буферы для лизиса

Буферы для лизиса варьируются от мягких, не содержащих детергентов, до более агрессивных денатурирующих растворов ( т.е. RIPA), содержащих додецилсульфат натрия (SDS) и другие ионные детергенты. Выбор буфера для лизиса зависит от сублокализации белка. Обычно для экстракции растворимых цитоплазматических белков используют мягкие неионогенные детергенты, такие как NP-40. Более жесткие буферы, такие как RIPA, используются для выделения белков, связанных с мембраной, и ядерных белков. Table 1 и Table 2 содержат рекомендации по буферу для лизиса, основанные на источнике белка и часто используемых рецептах буфера для лизиса. Для некоторых белков, таких как гистоны или образцы тканей, может потребоваться дополнительная обработка ультразвуком для полного высвобождения белков. Обработка ультразвуком также используется для разрушения ДНК для снижения вязкости раствора.

Таблица 2. Составы наиболее распространенных буферов для лизиса, используемых в Вестерн-блоттинге

Ингибиторы протеазы и фосфатазы

Другими важными компонентами буферов для лизиса являются ингибиторы протеаз и фосфатаз, которые предотвращают быстрый протеолиз и дефосфорилирование мишеней при лизисе клеток. Чтобы замедлить деградацию белка, мы советуем готовить свежие буферы перед каждым экспериментом и хранить клетки и буферы на льду в течение всей процедуры. В таблице 3 подробно описаны наиболее распространенные ингибиторы, используемые в Вестерн-блоттинге. Большинство из них теперь доступны в виде готовых к употреблению коктейлей:

Определение концентрации белка

Перед нанесением белка на гель важно определить концентрацию белка и нормализовать ее для образцов каждого эксперимента. Концентрацию белка можно определить с помощью анализа поглощения при 280 нм, Бредфорда (на основе кумасси) или анализа ВСА. Присутствие SDS в буфере для лизиса может помешать анализу Брэдфорда. В этом случае необходимо использовать анализ BCA. Мы рекомендуем загружать примерно 15-30 мкг белкового лизата, чтобы обеспечить надлежащий диапазон обнаружения белка.

Таблица 4. Состав 2X буфера Лэммли

Загрузка и выполнение условий буфера

Для рутинного вестерн-блоттинга рекомендуется запускать гель в восстанавливающих/денатурирующих условиях. Для этого лизат необходимо прокипятить в буфере для образцов при +95-100°С (5 минут) или при +70°С (10 минут). Затем образцы могут быть немедленно загружены в гель или сохранены при -20°C для последующего анализа. В некоторых случаях специфическое антитело-мишень не способно распознавать денатурированную форму белка. В этом случае неденатурирующих условий можно достичь, избегая использования SDS. Некоторые антитела распознают белки только в их невосстановленной или окисленной форме. В этом случае в буфер не следует включать восстановители, такие как β-меркаптоэтанол (β-ME) или DTT. См. Таблица 5 ниже описывает загрузочный буфер и условия буфера для движения геля для каждой цели.

Состояние	Образец	Буфер загрузки	Буфер для геля	Комментарий
Восстановленный и денатурированный	Паспорт безопасности	β-ME или DTT	Паспорт безопасности	Удаляет структуру белка высокого порядка, включая дисульфидные связи.
Уменьшенный	Нет паспорта безопасности	β-ME или DTT	Нет паспорта безопасности	Структура белка высокого порядка присутствует, но дисульфидные связи удалены.
Денатурированный	ПБ	Без β-ME или DTT	Паспорт безопасности	Удаляет структуру белков высокого порядка, но дисульфидные связи присутствуют.
Собственный	Нет паспорта безопасности	Без β-ME или DTT	Нет паспорта безопасности	Белок находится в нативной форме. Можно наблюдать мультимеры и белок-белковые взаимодействия.

ПродуктыЗдесь

• • Товары
  • Карьера
  • Заказ Вопросы
  • Свяжитесь с нами
• • Веб-инструменты
  • Литература
  • Индивидуальные продукты/услуги
  • Акции
  • Блог
  • Качественный
• • Техническая поддержка
  • Ресурсы поддержки
  • Заказ Вопросы
  • Найти дистрибьютора
  • Обратная связь
• • Компания
  • Политика конфиденциальности
  • Условия
  • Настройки файлов cookie
  • Налоговые формы
  • Торговые марки и патенты

Анализ по Брэдфорду на белок

Анализ Брэдфорда на белок
Эрик Марц для микробиологии 542, иммунологическая лаборатория

Анализ белка по Бредфорду широко используется из-за его чувствительность, скорость, удобство, отсутствие необходимости в УФ-совместимом спектрофотометр и возможность адаптации к 96-луночным планшетам. «Реактив Брэдфорда» — это кислотный краситель, который становится синим при контакте с водой. взаимодействует с белком. Полученная абсорбция является лучшей определился в 595 нм. Реагент обычно продается в виде концентрированный запас с 5-кратной рабочей силой. Белок стандартный или неизвестный должен быть достаточно разбавлен, чтобы не мешать с низким pH, достигаемым кислотой в реагенте.

Микропланшетный анализ Брэдфорда

Реагент и белок смешивают в лунках с плоским дном, 96-луночный планшет, и оптическую плотность считывают при 595 нм (или ближайшая доступная длина волны, доступная на 96-луночном планшет-ридере, которая может быть 570 нм или 620 нм). Как и во всех анализах, количество белка, помещенного в лунки, должно находиться в пределах результат анализа прямо пропорционален концентрации белка, «линейный диапазон» анализа. На практике Брэдфорд результат часто бывает не совсем линейным, и поэтому кривая, а не прямая линия лучше соответствует результатам.

По данным производителя, этот анализ в десять раз больше чувствительнее, чем поглощение при 280 нм. Если мы возьмем абсорбцию 0,1, чтобы быть минимально надежно обнаруживаемым, A ₂₈₀ может обнаружить минимум около 75 мкг/мл. Микропланшет Анализ Брэдфорда обеспечивает поглощение 0,1 примерно при 6 мкг/мл. Кроме того, микропланшеты Брэдфорда имеют то преимущество, что большие количество образцов может быть быстро считано без дорогостоящего УФ-совместимого кюветы.

Когда полный до краев, один колодец в 96-луночный планшет вмещает 300 микролитры; 200 мкл — удобный объем для использования на Что ж. Реактив Бредфорда (окраска фосфорной кислотой и смесь вода/метанол) предназначен для пятикратного разбавления белок. Поэтому в каждую лунку положим по 160 мкл белок, разведенный в воде; к этому мы добавим 40 микролитров Реактив Брэдфорда, благодаря чему достигается рекомендуемое 5-кратное разведение реагента.

Стандартная кривая

Анализ Брэдфорда откалиброван с использованием чистого белка известной концентрации, называемой «стандартным белком». Как и другие белков, результат анализа Брэдфорда отличается для разные белки. Вы знаете, что А ₂₈₀ о в два раза чувствительнее к IgG, чем к БСА. Брэдфорд наоборот: примерно в два раза чувствительнее к БСА, чем к IgG. Лучше всего использовать того же белка для стандарта, который вы хотите оценить в неизвестный. Однако допустимо использовать другой белок для стандарта при условии, что вы знаете поправочный коэффициент для неизвестный белок. По традиции белки разводят в дистиллированной воде. для анализа Брэдфорда.

1. Налейте 160 мкл воды в колодец А-1, который будет взят для холостого опыта и вычитается из абсорбции всех других лунок.
2. Используйте стандартный белок в концентрации 0,05 мг/мл (50 мкг/мл; разбавьте предоставленный стандарт до 0,05 мг/мл, если он более концентрированный). Выполните трехкратное разведение следующим образом:

          микролитров/лунка
         ------------------
                 Стандарт при анализе
   Рядовая вода 0,05 мг/мл мг/мл**
   Б 144 16*
   С 120 40
   Д 80 80
   Е 0 160
   * Используйте пипетку P20; P200 подходит для 30 и более микролитров. 
   ** Рассчитайте это для объема 160 мкл, а не для последних 200 мкл.
   объем микролитров. Это облегчает интерпретацию ваших неизвестных.
    

3. Добавьте 40 мкл реагента Бредфорда в каждую лунку и пипетки восемь раз, чтобы хорошо перемешать. При пипетировании избегайте создание пузырьков, удерживая наконечник пипетки глубоко под поверхностью. Если вы начнете с нуля и перейдете к тому же или выше концентрации, вы можете использовать один и тот же желтый наконечник пипетки для всех колодцы. (Если вы хотите выдуть остатки смеси из наконечника, сделайте это на ткань, а не на реагент Брэдфорда.)
4. Проверьте лунки на наличие пузырьков. Если пузырьки присутствуют, используйте P20, чтобы добавить 5 мкл этанола на поверхность лунки — это разрушит пузырьки. не влияя на абсорбцию.
5. Измерьте оптическую плотность ваших лунок на доступной длине волны на ридере ближе всего к 595 нм. (Производитель реагентов рекомендует прочитать анализа от 5 до 60 минут после смешивания.) Запишите время, когда вы читаете табличка на распечатке (если считыватель не печатает время).
6. Находятся ли значения поглощения в допустимом диапазоне? Учитывая абсорбция бланка (около 0,38; некоторые читатели сообщают об этом и некоторые нет), каков надежный диапазон для скорректированного поглощения?
7. Если абсорбция не находится в допустимом диапазоне, увеличьте или уменьшить концентрацию исходного белкового стандарта чтобы поместить значения в желаемый диапазон, и снова запустите стандартную кривую. Если вы запустите его снова, перенесите старую заготовку в другую лунку в ряду А и сделайте новую в хорошо A1, так что это соответствует новой стандартной кривой.
8. Опционально: После получения приемлемых результатов диапазон, вы можете сделать более подробную стандартную кривую, такую ​​как как этот в двух экземплярах:

   Стандарт рядовой воды, мг/мл
   А 160 0
   Б 144 16
   С 130 30
   Д 115 45
   Е 90 70
   Ф 60 100
   Г 30 130
   Н 0 160
    

9. Нарисуйте свои результаты (поглощение по вертикальной оси/ординате/Y по отношению к белку мг/мл по горизонтальной оси/абцисса/X).
10. Дополнительно: Перечитайте табличку. Иметь абсорбцию сильно изменилось? Сколько времени прошло между чтениями?
11. Покончив с тарелкой, бросьте ее в раковину и промыть лунки несколько раз дистиллированной водой (для удаления белок), а затем этанол, пока не исчезнет вся синева. Промыть снова дистиллированной водой и дайте его сушить с крышкой для последующего повторного использования.

Определение неизвестных (фракции из колонки с сефадексом)

Поглощение в анализе Брэдфорда варьируется от опыта к опыту в зависимости от от партии используемого реагента, времени между смешиванием и снятием показаний, и какой считыватель используется. Поэтому лучше использовать стандартный кривой рядом с вашими неизвестными, смешивая реагент в стандарте колодцы одновременно с вашими неизвестными колодцами.

Общее количество белка, помещенного в наши колонки с сефадексом, составляет примерно 100 миллиграмм. Это будет распространяться примерно через 40 фракции по мл. Какая чувствительность нам нужна? Если дробь имеет менее 0,5 мг/мл, нам не нужно знать концентрацию точно, так как он не будет вносить достаточный вклад в пик, чтобы быть включены в пул. Анализ может обнаружить 0,005 мг/мл, поэтому мы развести каждую фракцию в 100 раз, сделав 0,5 мг/мл в неразбавленном дробь минимум, который мы можем надежно обнаружить. Это требует, чтобы мы потребляем только крошечную часть каждой фракции.

12. Постройте стандартную кривую разведения белка в своей тарелке.
13. Спланируйте схему планшета с двумя лунками на неизвестную фракцию. Первая лунка каждой пары будет использоваться только для разбавления 1/10; к нему не будет добавлен реагент Брэдфорда. Вторая скважина будет содержать разведение 1/100, к которому будет добавлен реагент Брэдфорда. В каждую из пар лунок для ваших неизвестных налейте по 144 мкл воды.
14. С помощью P20 добавьте 16 мкл неизвестного вещества в первую лунку каждой пары, и, касаясь пипеткой нижнего угла, пипетировать внутрь и наружу десять раз смешать. Перенесите 16 мкл разведения 1/10 во вторую лунку. пары и смешать. Поскольку цель тестирования дробей состоит в том, чтобы решить какие фракции объединять, на данный момент требуется только грубая точность. Следовательно, вы можете использовать один и тот же наконечник для многих неизвестных разведений .
15. Добавьте 40 мкл реагента Бредфорда во вторую лунку каждой пары (разведение 1/100) и пипеткой внутрь и наружу 8-10 раз хорошо перемешать. При пипетировании избегайте образования пузырьков удерживая наконечник пипетки глубоко под поверхностью, касаясь дна угол.
16. Проверьте лунки на наличие пузырьков. Если пузырьки присутствуют, используйте P20, чтобы добавить 5 мкл этанола на поверхность лунки — это разрушит пузырьки. не влияя на абсорбцию.
17. Измерьте оптическую плотность ваших лунок на доступной длине волны на ридере ближе всего к 595 нм. (Производитель реагентов рекомендует прочитать анализа от 5 до 60 минут после смешивания.) Запишите время, когда вы читаете табличка на распечатке.