Анализ свободных фракций лекарственного средства в сыворотке человека с помощью сверхбыстрой аффинной экстракции и двумерной аффинной хроматографии
. 2016 Январь; 408 (1): 131-40.
doi: 10.1007/s00216-015-9082-7. Epub 2015 13 октября.
Сивэй Чжэн 1 , Мария Подариу 1 , Райан Мацуда 1 , Дэвид С. Хейдж 2
Принадлежности
- 1 Химический факультет Университета Небраски, Линкольн, Небраска, 68588, США.
- 2 Химический факультет Университета Небраски, Линкольн, Небраска, 68588, США.
[email protected].
- PMID:
- PMCID: PMC4767597
- DOI: 10.1007/s00216-015-9082-7
Бесплатная статья ЧВК
Xiwei Zheng et al. Анальный биоанальный хим. 2016 Январь
Бесплатная статья ЧВК
. 2016 Январь; 408 (1): 131-40.
doi: 10.1007/s00216-015-9082-7. Epub 2015 13 октября.
Авторы
Сивэй Чжэн 1 , Мария Подариу 1 , Райан Мацуда 1 , Дэвид С.
Хейдж 2
Принадлежности
- 1 Химический факультет Университета Небраски, Линкольн, Небраска, 68588, США.
- 2 Химический факультет Университета Небраски, Линкольн, Небраска, 68588, США. [email protected].
- PMID: 26462924
- PMCID: PMC4767597
Абстрактный
Сверхбыстрая аффинная экстракция и двухмерная высокоэффективная аффинная хроматографическая система использовались для измерения свободных фракций различных лекарств в сыворотке и при типичных терапевтических концентрациях.
В этой работе использовались объединенные образцы нормальной сыворотки или сыворотки больных диабетом. Было исследовано несколько моделей лекарственных препаратов (например, хинидин, диазепам, гликлазид, толбутамид и ацетогексамид), которые представляли собой относительно широкий диапазон терапевтических концентраций и сродств к человеческому сывороточному альбумину (ЧСА). Двумерная система состояла из микроколонки с ЧСА для выделения свободной фракции лекарственного средства, за которой следовала аналитическая колонка с ЧСА большего размера для дальнейшего разделения и измерения этой фракции. Факторы, которые были оптимизированы в этом методе, включали используемые скорости потока, размеры колонок и время переключения колонок. Конечное время экстракции, используемое для выделения свободных фракций лекарственного средства, составляло 333-665 мс или менее. Константы скорости диссоциации для нескольких препаратов с растворимым ЧСА были измерены во время оптимизации системы, что дало результаты, которые соответствовали эталонным значениям.
Ключевые слова: Микроколонка сродства; Связывание лекарственного средства с белком; Фракция свободного препарата; Альбумин сыворотки человека; двумерная аффинная хроматография; Сверхбыстрая аффинная экстракция.
Заявление о конфликте интересов
w3.org/1998/Math/MathML» xmlns:p1=»http://pubmed.gov/pub-one»> У авторов нет других вопросов или потенциальных конфликтов интересов, которые следует раскрытьЦифры
Рисунок 1
Общая схема, используемая для…
Рисунок 1
Общая схема, используемая для выделения свободной фракции лекарственного средства из…
фигура 1Общая схема, используемая для выделения свободной фракции лекарственного средства из связанной с белком формы лекарственного средства и других компонентов в сыворотке с использованием сверхбыстрой аффинной экстракции и двумерной аффинной системы.
Рисунок 2
Структуры модельных препаратов…
Рисунок 2
Структуры модельных препаратов, рассмотренных в этом отчете.
Порция…
Структуры модельных препаратов, рассмотренных в этом отчете. Часть в пунктирной рамке представляет основную структуру препарата сульфонилмочевины.
Рисунок 3
Измерение фракций свободных лекарств…
Рисунок 3
Измерение фракций свободного лекарства при различных скоростях потока инъекции. Эти участки были…
Рисунок 3 Измерение фракций свободного лекарства при различных скоростях потока инъекции. Эти графики были получены для инъекций 1,0 мкл (а) 10 мкМ диазепама или смеси 10 мкМ диазепама/20 мкМ HSA на 5 мм × 2,1 мм в.д. Микроколонка HSA и (b) 10 мкМ хинидина или смесь 10 мкМ хинидина/20 мкМ HSA на 10 мм × 2,1 мм в.
Рисунок 4
Определение скорости диссоциации…
Рисунок 4
Определение констант скорости диссоциации хинидина (а) и диазепама (б) с…
Рисунок 4Определение констант скорости диссоциации (а) хинидина и (б) диазепама с растворимым ЧСА с использованием сверхбыстрой аффинной экстракции и уравнения. (1). Условия хроматографии были такими же, как на рис. 3. Уравнение для наиболее подходящих линий: (а)
Столбики погрешностей представляют собой диапазон ± 1 SD. ( н = 4). Рисунок 5
Влияние времени переключения клапана…
Рисунок 5
Влияние времени переключения клапана на (а) извлечение хинидина при 0,5…
Рисунок 5 Влияние времени переключения клапана на (а) выделение хинидина при 0,5 мл/мин на 25 мм × 2,1 мм в.д. Колонка HSA, введенная в эксплуатацию, с внутренним диаметром 10 мм × 2,1 мм. Микроколонка HSA через разное время после введения образца 5 мкл 10 мкМ хинидина в первую колонку при 3,0 мл/мин, и (b) кажущиеся свободные фракции лекарственного средства, которые были измерены с использованием той же двумерной системы и хроматографических условий. как в (а) с образцом, который содержал 10 мкМ хинидина и 600 мкМ HSA.
См. это изображение и информацию об авторских правах в PMC
Цитируется
Последние достижения в супрамолекулярном аффинном разделении: аффинная хроматография и родственные методы.
Вулфорк А.Г., Ифтехар С., Овбуде С., Су К., Шармин С., Кей И., Джонс Дж., Хейдж Д.С. Вулфорк АГ и др. Adv Хроматогр. 2021;58:1-74. дои: 10.1201/9781003223405-1. Adv Хроматогр. 2021. PMID: 36186535 Бесплатная статья ЧВК.
Оценка стабильности микроколонок при сверхбыстрой аффинной экстракции для исследований связывания и скорости.
Ифтехар С., Хаге Д.С. Ифтехар С. и др. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2021 15 декабря;1187:123047. doi: 10.1016/j.jchromb.2021.123047. Epub 2021 17 ноября. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2021. PMID: 34823097
[Достижения в хроматографии в изучении взаимодействий белков плазмы наркотиков].
Бай Ю, Фань Ю, Гэ Г, Ван Ф. Бай Ю и др. Се Пу. 2021 окт; 39(10):1077-1085. doi: 10.3724/SP.J.1123.2021.06028. Се Пу. 2021. PMID: 34505429 Бесплатная статья ЧВК. Обзор. Китайский язык.
Характеристика связывания лекарств с альфа- 1 -кислый гликопротеин в клинических образцах с использованием сверхбыстрой аффинной экстракции.
Бирам С.
Р., Чжан С., Сух К., Кларк В.А., Хейдж Д.С.
Бирам С.Р. и др.
J Chromatogr A. 2021 Jul 19;1649:462240. doi: 10.1016/j.chroma.2021.462240. Epub 2021 11 мая.
Дж Хроматогр А. 2021.
PMID: 34034105
Бесплатная статья ЧВК.Кинетический анализ с помощью аффинной хроматографии.
Ифтехар С., Овбуде С.Т., Хаге Д.С. Ифтехар С. и др. Фронт хим. 2019 18 окт;7:673. doi: 10.3389/fchem.2019.00673. Электронная коллекция 2019. Фронт хим. 2019. PMID: 31681727 Бесплатная статья ЧВК. Обзор.
Р., Чжан С., Сух К., Кларк В.А., Хейдж Д.С.
Бирам С.Р. и др.
J Chromatogr A. 2021 Jul 19;1649:462240. doi: 10.1016/j.chroma.2021.462240. Epub 2021 11 мая.
Дж Хроматогр А. 2021.
PMID: 34034105
Бесплатная статья ЧВК.Просмотреть все статьи «Цитируется по»
Типы публикаций
термины MeSH
вещества
Грантовая поддержка
- R01 DK069629/DK/NIDDK NIH HHS/США
- R01 GM044931/GM/NIGMS NIH HHS/США
Субклеточные фракции животных для анализов in vitro
Чем мы можем помочь?
Перейти к содержимому
Субклеточные фракции, такие как микросомы, S9 и цитозоль животных, представляют собой тест-системы, используемые при разработке лекарств для прогнозирования печеночного и внепеченочного метаболизма лекарственных соединений у людей в рамках профиля ADME соединения (абсорбция, распределение, метаболизм и экскреция) .
Системы поиска и сравнения
Выберите категорию CategoryCryopreserved Hepatocytes (Cryoplateable)Cryopreserved Hepatocytes (Pooled)Cryopreserved Hepatocytes (Single Donor)Cryopreserved Hepatocytes (Transporter Qualified)Cryopreserved Kupffer CellsHuman Genotyped MicrosomesHuman Liver HomogenateIntestine Microsomes & S9Kidney Microsomes & S9Liver LysosomesLiver MicrosomesLiver S9 FractionLung Microsomes & S9Skin Microsomes & S9
Select a Species ВидыСобака — БигльМорская свинка — Хартли АльбиноХомяк — Сирийский ЧеловекМинипиг — Геттинген Минипиг — СинклерМинипиг — Юкатанская Обезьяна — Яванский Обезьяна — МармозеткаОбезьяна — Мышь Резус — B6C3F1Мышь — Balb/cМышь — C57BL/6Мышь — CD1Кролик — Новозеландская БелаяКрыса — ФишерРат — Sprague DawleyRat0003
Выберите пол ВсеЖЕНСКИЕ СМЕШАННЫЕ КобелиN/A
Микросомы содержат самую высокую концентрацию многих важных ферментов, метаболизирующих лекарственные средства, включая ферменты цитохрома P450 (CYP) и ферменты UDP-глюкуронозилтрансферазы (UGT).
Фракции S9 содержат смесь цитозольных и микросомальных ферментов, которые экспрессируют широкий спектр ферментов фазы I и фазы II и рекомендуются для многих различных исследований метаболизма лекарственных средств и фармакокинетических исследований. Цитозольные фракции содержат множество уникальных ферментов, метаболизирующих лекарственные средства, которые не обогащены микросомами, и являются рекомендуемой тест-системой для оценки растворимых метаболических реакций фазы II тестируемого соединения, особенно после того, как реакции наблюдались в S9.фракций, так как количество микросомальных ферментов значительно снижено по сравнению с цитозольной фракцией, что позволяет улучшить оценку метаболизма, не связанного с CYP.
В качестве стандартных продуктов мы предлагаем субклеточные фракции, выделенные из тканей следующих доклинических видов животных, а также фракции клеток человека. Если вы не видите то, что вам нужно ниже, посетите нашу страницу Индивидуальные продукты, чтобы узнать, как наша команда может удовлетворить нестандартные запросы.
Мы предлагаем объединенные субклеточные фракции, в том числе соответствующие S9, цитозоль и микросомы печени, кишечника, почек и легочной ткани Cynomolgu. Другие нестандартные препараты ткани обезьяны могут быть доступны по запросу.
Мы предлагаем объединенные субклеточные фракции, включая соответствующие S9, цитозоль, тритосомы (лизосомы, обработанные неионогенным поверхностно-активным веществом) и микросомы из печени, кишечника, почек, кожи и тканей легких крыс. Варианты включают четыре различных штамма крыс (Fischer 344, Sprague-Dawley, Wistar и Wistar Han) для некоторых препаратов. Другие пользовательские препараты ткани крысы могут быть доступны по запросу.
Мы предлагаем объединенные субклеточные фракции, включая соответствующие S9, цитозоль и микросомы из ткани печени, кишечника, почек, кожи и легких мышей. Варианты включают три различных линии мышей (CD-1, BALB/c и B6C3F1) для некоторых препаратов. Другие пользовательские препараты ткани мыши могут быть доступны по запросу.
Мы предлагаем объединенные субклеточные фракции, включая соответствующий S9, цитозоль и микросомы из печени, кишечника, почек и легких, выделенные из ткани собаки породы бигль. Другие индивидуальные препараты собачьей ткани могут быть доступны по запросу.
Мы предлагаем объединенные субклеточные фракции, включая соответствующие S9, цитозоль и микросомы, выделенные из печени мини-свиней Геттингена, Синклера и Юкатана, а также ткани кожи из Геттингена. Другие пользовательские препараты субклеточных фракций или тканей мини-свиней могут быть доступны по запросу.
Мы предлагаем объединенные субклеточные фракции, включая соответствующий S9, цитозоль и микросомы из ткани печени новозеландского кролика. Другие индивидуальные препараты субклеточных фракций или тканей кролика могут быть доступны по запросу.
Мы предлагаем объединенные субклеточные фракции, в том числе соответствующие S9, цитозоль и микросомы из ткани печени самцов морской свинки-альбиноса Hartley.
Другие индивидуальные препараты субклеточных фракций или ткани морской свинки могут быть доступны по запросу.
Мы предлагаем объединенные субклеточные фракции, включая соответствующий S9, цитозоль и микросомы из ткани печени самцов золотистого сирийского хомячка. Другие пользовательские препараты субклеточных фракций или ткани хомяка могут быть доступны по запросу.
Микросомы, S9, цитозоль и тритосомы
Наша опытная команда по продуктам может выделить субклеточные фракции из самых разных типов тканей токсикологически значимых видов. Стандартные субклеточные фракции включают S9, цитозоль, микросомы и тритосомы крысы (лизосомы, обработанные неионным поверхностно-активным веществом).
Препарат тритосом предлагает упрощенную систему для изучения того, как соединения модифицируются в лизосомальном компартменте по сравнению с моделями клеточной культуры или мелких животных, и является более репрезентативным, чем использование очищенных рекомбинантных белков, поскольку несколько ферментов/физических характеристик могут работать синергически, чтобы влиять на общую стабильность или активация.
Узнайте больше о преимуществах использования обработанных лизосом в качестве тест-системы in vitro в разделе часто задаваемых вопросов на нашей странице субклеточных фракций печени крысы.
Субклеточные тест-системы в доклинических анализах
Субклеточные препараты готовятся с использованием методов, обеспечивающих максимальную функциональность и ферментативную активность. Субклеточные фракции животных являются предпочтительной тест-системой для доклинических исследований метаболизма in vitro, чтобы определить, какие доклинические виды имеют метаболический профиль, наиболее близкий к человеческому, и изучить, как взаимодействие с ферментами, экспрессируемыми в разных органах, влияет на распределение лекарственного средства. Конкретные доклинические исследования, в которых субклеточные фракции используются в качестве предпочтительной тест-системы, включают метаболическую стабильность, фенотипирование реакций, ингибирование/индукцию ферментов, а также исследования видов, штаммов и гендерных различий в метаболизме лекарственных средств.
Хотя печень является основным местом метаболизма, и фракции из ткани печени животных могут помочь разработчикам лекарств предсказать метаболизм соединения в печени пациентов, важные процессы, связанные с утилизацией лекарства, также могут происходить в других тканях. Например, эстераза представляет собой фермент, метаболизирующий лекарства, присутствующий в клетках кишечника в месте всасывания, ответственный за гидролиз лекарств сложноэфирного типа 1 , и в некоторых случаях ее лучше всего изучать с помощью тест-систем из кишечной ткани. Для терапевтических средств, применяемых при лечении дыхательных путей или через кожные пластыри, могут потребоваться субклеточные фракции легких или кожи, чтобы правильно идентифицировать ферменты, взаимодействующие с лекарством, до того, как оно впитается в кровоток.
Убедитесь, что ваши микросомы и фракции S9 правильно активированы.
Для достижения наилучших результатов анализов с использованием микросом и фракций S9 мы рекомендуем использовать регенерацию NADPH для поддержания высоких уровней метаболизма, следя за тем, чтобы уровни NADPH не были ограничивающим фактором в ваших инкубациях.
Наша предпочтительная система, RapidStart TM , использует ферментативную реакцию, которая превращает НАДФ в НАДФН, который затем используется в качестве кофактора CYP и окисляется обратно в НАДФ, и цикл продолжается, обеспечивая стабильные уровни НАДФН на протяжении всей инкубации. Быстрый Старт TM Регенерация NADPH легко активируется простым добавлением воды. Наша простая в использовании формула является самой удобной и гибкой системой регенерации NADPH, которую вы найдете, позволяя пользователям легко настраивать возможности системы, просто изменяя количество добавляемой воды. RapidStart TM идеально подходит для долгосрочных и краткосрочных инкубаций и поддерживает функцию рекомбинантных ферментов и субклеточных фракций, позволяя получать наиболее точные и надежные данные во время анализов in vitro.
Не видите то, что вам нужно? Другие препараты фракций животных клеток могут быть доступны!
Если вам нужны субклеточные фракции, недоступные в наших стандартных предложениях продуктов, можно легко заказать специальные препараты для удовлетворения конкретных потребностей любого исследования.
Наша специально назначенная команда по продуктам на заказ регулярно выделяет и готовит субклеточные фракции из более чем 45 различных видов, может выполнять целый ряд характеристических анализов и имеет возможности для удовлетворения потребностей, недоступных у большинства поставщиков — нестандартные штаммы грызунов, сельскохозяйственных животных, насекомых, ненадежных выделения тканей, таких как надпочечники или тощая кишка, с более чем 40 характеристическими анализами, доступными для обеспечения адекватной деятельности по сбору данных. Ознакомьтесь со всеми нашими возможностями индивидуальной подготовки или свяжитесь со специалистом, чтобы узнать, как мы можем помочь.
Ссылки
1 Inoue, Michiko, et al. «Различие видов и характеристика кишечной эстеразы в отношении гидролизующей активности лекарств сложноэфирного типа». Японский журнал фармакологии , том. 29, нет. 1, 1979, стр. 9–16., doi: 10.1254 / jjp.29.9.
См. наши возможности подготовки продукции по индивидуальному заказу
Ознакомьтесь с полным перечнем характеристических анализов, сведениями о гарантии качества, типичным графиком подготовки и т.