Масло рыжиковое для похудения: Рыжиковое масло для похудения

годах железного и бронзового веков была важной сельскохозяйственной культурой.Со времен Римской империи до открытия газа и электричества это масло использовалось в масляных лампах, а также в качестве обычного съедобного продукта. Camelina sativa принадлежит к тому же семейству, что и масличный рапс (Cruciferae или Brassicaceae), но представляет собой другой род. Шрот камелины является побочным продуктом добычи масла камелины. Нефть — потенциальный источник биотоплива. Sustainable Oils, совместное предприятие компаний Targeted Growth и Green Earth Fuels, было запущено в конце 2007 года и ориентировано на исследования, разработку и коммерциализацию камелины для производства биодизельного топлива.Камелина требует минимального количества воды и может быть собрана с помощью традиционного оборудования. Благодаря этим свойствам его можно выращивать на залежи или как севооборот. Следовательно, он не конкурирует с традиционными продовольственными культурами, а вместо этого создает сценарий «еда плюс топливо».

«Это важный шаг в процессе создания сильного и устойчивого рынка для производства камелины», — сказал Стив Сандрони, менеджер по производству и логистике компании Sustainable Oils. «Открытие возможностей кормления животных для шрота из камелины обеспечивает рынок для наиболее значимого побочного продукта производства масла из камелины.Особенно в то время, когда кормушки для скота борются с высокими ценами на сырье, шрот из камелины может быть очень привлекательным вариантом », — продолжил он. «Еда — отличный источник белка. С уровнем протеина 40% или более, он похож на соевый шрот, но предлагает дополнительное преимущество, заключающееся в высоком содержании омега-3 жирных кислот ».

Характеристики семян

Семена камелины, безусловно, являются наиболее важной частью растений для производства биотоплива и кормов. Семена очень маленькие, и в одном килограмме содержится более миллиона семян.Семена содержат 29-39% масла и 23-30% белка. Масло состоит из 12% насыщенных жирных кислот, что довольно мало и потенциально может быть хорошим пищевым маслом. Кроме того, масло содержит 54% полиненасыщенных жирных кислот (пуфа), что довольно много. Это делает масло подверженным самоокислению и сокращает срок хранения. 34% масла — мононенасыщенные, из которых 2-4% — эруковая кислота. Масло содержит значительное количество линолевой кислоты, высокое содержание эйкозеновой кислоты и низкое содержание глюкозинатов. Высокое содержание линоленовой кислоты важно для производства биодизельного топлива, поскольку оно придает продукту температуру застывания около -26ºC, что значительно ниже, чем у других предлагаемых масел, и важно для пользователей в более холодных частях мира.Шрот камелины сопоставим с соевым шротом и содержит около 45-47% сырого протеина и 10-11% клетчатки. Масло камелины можно использовать как пищевое и промышленное (включая биотопливо). Единственная необходимая обработка масла перед дезодорацией — фильтрация. Никакой нейтрализации или отбеливания не требуется, что экономит затраты и энергию, а также позволяет избежать загрязнения побочными продуктами. Его можно использовать в кормах для животных и птиц, в косметике (средства по уходу за кожей), в линолеуме (с высоким содержанием линолевой кислоты) и даже в качестве декоративной культуры (сушеные цветы).

Повышение урожайности

Чтобы использовать масло камелины для производства биодизеля экономичным способом, урожайность должна увеличиться. В американском штате Монтана исследователи работают над этим, оптимизируя ввод азота и фосфора. Это повысило урожайность масла до 1200 фунтов с акра (1340 кг / га). По словам Сэма Хуттенбауэра, генерального директора Great Plains (The Camelina Company), камелину можно выращивать в севообороте пшеницы.Фермеры, которые следовали схеме выращивания пшеницы и пара, как это часто наблюдается в Вашингтоне и Орегоне, могут перейти на схему пшеница-камелина-пшеница и реализовать до 900 литров масла камелины на акр и повысить урожайность на 15%. пшеница. Высокая стоимость камелины препятствовала дальнейшим инвестициям в производство этой культуры, но, учитывая конкуренцию текущих кормовых или топливных культур, Sustainable Oils намеревается построить завод по производству биодизеля мощностью 100 миллионов галлонов в год (378 миллионов литров) в Монтане, используя камелину в качестве сырье.Предприятие планирует привлечь до пятидесяти фермеров Монтаны для выращивания сырья. Доктор Билл Шиллингер из Университета штата Вашингтон недавно описал бизнес-модель камелины. Он подсчитал, что с 1400 фунтов семян на акр по цене 16 центов за фунт, камелина принесет 224 доллара за акр; Белая пшеница объемом 28 бушелей по цене 8,23 доллара за бушель принесет 230 долларов. С тех пор пшеница снизилась, поэтому камелина более привлекательна.

Использование в качестве корма

Camelina имеет еще одно преимущество — побочный продукт муки, который можно успешно использовать в рационах для говядины, молочных продуктов, птицы и рыбы.Жмых из камелины холодного отжима содержит от 8 до 11% остаточного масла, и это масло содержит от 34 до 38% жирных кислот омега-3 и очень высокий уровень витамина Е. Шрот также является отличным источником белка и имеет очень низкое содержание золы. . В настоящее время в Университете штата Монтана проводятся испытания кормления говядиной, которые показывают, что дневные нормы прироста на откормочных площадках были выше при рационе, содержащем 3,5% шрота из камелины, чем в рационах, содержащих 3,5 и 7,0% соевого шрота.

Исследователи из кооперативного отделения Университета штата Юта провели исследование (2007 г.) с использованием камелины в закваске для индейки.Результаты показывают, что шрот из камелины может быть потенциально полезным второстепенным ингредиентом в рационе индейки, если это экономически целесообразно, но следует проявлять осторожность при использовании его более 5% готового корма в стартовом рационе для птицы. В прилагаемом тесте аналогичный набор веса и конверсия корма были достигнуты при использовании рациона, содержащего масло камелины в качестве замены обычно используемого растительного масла, по сравнению с контрольным рационом. Французский исследователь из INRA в Ренне изучил влияние камелины на жирнокислотный состав молока и растекаемость масла (2007).

Питательные и реологические свойства сливочного масла зависят от жирнокислотного состава молока. Следовательно, подкормка масличных семян, богатых ненасыщенными жирными кислотами, может повлиять на свойства масла. Они сравнили контрольную диету, состоящую из 60% кукурузного силоса и дополненную высокоэнергетическими и азотсодержащими концентратами, с двумя экспериментальными диетами, разработанными для обеспечения того же количества полиненасыщенных жирных кислот либо из семян верблюда (630 г / день, диета CS), либо из муки из камелины. (2 кг / сут, диета CM).Рацион верблюда имел тенденцию к снижению потребления сухого вещества, но не оказывал значительного влияния на производство молока. Они привели к небольшому снижению молочного белка и сильному снижению надоя и содержания молочного жира.

Диета CM привела к более сильному снижению содержания жира, чем диета CS. Камелина вырабатывала большую долю мононенасыщенных жирных кислот с диетой CM. Камелина также привела к увеличению конъюгированных линолевых кислот. Камелина не влияла на параметры приготовления масла, за исключением времени сбивания молока от коров, откормленных КМ, которое было больше.Масла в диетах из камелины были мягче при всех тестируемых температурах, особенно в рационе CM. На основании результатов исследователи пришли к выводу, что кормление камелинами может изменить профиль жирных кислот молока и намазываемость масла. В Финляндии жмых из вытеснителя камелины изучали (2006 г.) в эксперименте с бройлерами, чтобы изучить его влияние на продуктивность и качество мяса. Экспеллер Camelina линейно снижал рост птицы. Это также снизило их потребление корма и коэффициент конверсии корма на начальном этапе (1-14 дней).

Кормление камелины значительно повысило уровень омега-3 жирных кислот в мясе бройлеров. В основном это было связано с увеличением линоленовой кислоты. Кормление не оказало отрицательного влияния на сенсорные качества мяса бройлеров. Мясо бройлеров-самок, которые получали 5% коровьего цыпленка в рационе, было значительно более нежным, чем мясо, полученное путем кормления 10% ингредиента.

Источник: журнал Feed Tech Том 12. No.9

ω-3 ПНЖК, богатые побочными продуктами камелинового масла, улучшают системный метаболизм и функции клеток селезенки у свиней на откорме

Реферат

Жмыхи камелиновые, полученные после экстракции масла из растения Camelina sativa. В этом исследовании жмыхи из камелины скармливались свиньям на откорме в течение 33 дней, и его влияние на продуктивность, биохимические аналиты плазмы, про / противовоспалительные медиаторы и антиоксидантную детоксицирующую защиту в селезенке было исследовано в сравнении с подсолнечным шртом.24 гибридных свиньи TOPIG были случайным образом распределены на одну из двух экспериментальных диетических обработок, содержащих либо 12% подсолнечного шрота (обработка 1-T1), либо 12,0% жмыхов из верблюжьей жмыха, богатых полиненасыщенными жирными кислотами ω-3 (ω-3 ПНЖК) ( лечение 2-Т2). Результаты показали отсутствие влияния диеты Т2 (лепешки из верблюжьей шерсти) на потребление корма, средний привес или эффективность корма. Употребление кормовидной диеты привело к значительному снижению концентрации глюкозы в плазме (18,47%) с тенденцией к снижению холестерина в плазме.В селезенке диета Т2 модулирует клеточный иммунный ответ за счет снижения белка и экспрессии генов провоспалительных маркеров, интерлейкина 1-бета (IL-1β), фактора некроза опухоли альфа (TNF-α), интерлейкина 6 (IL-6) и интерлейкин (ИЛ-8) и циклооксигеназа 2 (ЦОГ-2) по сравнению с диетой Т1. Напротив, диета T2 увеличивала (P <0,05) в селезенке экспрессию мРНК антиоксидантных ферментов, каталазы (CAT), супероксиддисмутазы (SOD) и глутатионпероксидазы 1 (GPx1) в 3,43, 2,47 и 1,83 раза соответственно, индуцируемая азотная кислота. оксидсинтаза (iNOS) (4.60 раз), эндотелиальная синтаза оксида азота (eNOS) (3,23 раза) и общий уровень антиоксидантов (9,02%) в плазме. Камелиновая диета увеличивала также мРНК гамма-рецептора, активируемого пролифератором пероксисом (PPAR-γ), и снижала таковую митоген-активированной протеинкиназы 14 (p38α MAPK) и ядерного фактора энхансера гена каппа-легкого полипептида в B-клетках (NF-κB). При таком уровне включения (12%) жмыхи из верблюжьей жмыха представляют собой потенциально альтернативный источник корма для свиней, который сохраняет высокое содержание ω-3 ПНЖК, что указывает на антиоксидантные свойства за счет стимуляции экспрессии детоксифицирующих ферментов и подавления активности селезенки маркеры воспаления.

Образец цитирования: Taranu I, Gras M, Pistol GC, Motiu M, Marin DE, Lefter N, et al. (2014) Побочные продукты масла камелины, богатые ω-3 ПНЖК, улучшают системный метаболизм и функции клеток селезенки у свиней на откорме. PLoS ONE 9 (10): e110186. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0110186

Редактор: Гуннар Ло, Немецкий институт питания человека, Потсдам-Ребрюке, Германия

Поступила: 1 июля 2014 г .; Одобрена: 8 сентября 2014 г .; Опубликован: 10 октября 2014 г.

Авторские права: © 2014 Taranu et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Доступность данных: Авторы подтверждают, что по утвержденным причинам к данным, лежащим в основе выводов, применяются некоторые ограничения доступа. Все соответствующие данные находятся в документе и его файлах с вспомогательной информацией.

Финансирование: Эта работа была поддержана Национальным исследовательским проектом Министерства исследований и технологий Румынии: PNII-09380401 / 2008-2012 PNII-09380202 / 2008-2012.Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Исследования в области питания и науки о пищевых продуктах обусловлены растущим спросом потребителей на качество и безопасность пищевых продуктов, а также растущим осознанием сложной связи между питанием и здоровьем. Это привело к использованию природных ресурсов, богатых активными соединениями, с благотворным воздействием на здоровье животных и человека.К таким биологически активным соединениям, представляющим интерес, относятся полиненасыщенные жирные кислоты (ПНЖК), особенно ω-3 и ω-6 ПНЖК, антиоксиданты, флавоноиды, витамины и минералы. Рыбий жир и растительные масла (например, льняное или рапсовое) являются одними из наиболее известных источников ПНЖК, оказывающих укрепляющее влияние на параметры сыворотки, иммунные медиаторы и противовоспалительные реакции, которые широко изучались у людей и животных [1] — [ 3]. Кормление мышей диетическим рыбьим жиром приводило к снижению выработки интерлейкинов и фактора некроза опухоли [4], в то время как выработка IgG и IgE повышалась за счет использования большого количества рыбьего жира [5].Льняное масло в рационе свиней увеличивало долю длинноцепочечных ПНЖК у плода и новорожденных в период кормления грудью [6]. Кроме того, кормление свиноматок льняным семеном и льняной мукой оказало положительное влияние на состав молока (повышенное содержание белка), а также на рост их поросят после отъема и иммунную резистентность (более высокая концентрация сывороточного антитела против овальбумина) [7]. Прием добавок рапсового масла, богатого ω-3 ПНЖК, снижает уровень холестерина и соотношение ЛПНП и ЛПВП [8]. Аналогичным образом, концентрации общего холестерина, холестерина ЛПВП, триглицеридов и фосфолипидов в сыворотке также были значительно ниже у самцов мышей с ускоренным старением, получавших диету, богатую ω-3 ПНЖК (масло периллы), по сравнению с мышами, получавшими ω-6 ПНЖК. обильное питание (подсолнечное масло) [9].Существует большой объем данных, касающихся эффектов ПНЖК и некоторых их источников; тем не менее, этих источников ПНЖК недостаточно для пищевой промышленности. Новые источники необходимо исследовать на предмет влияния на питание и здоровье. Некоторые результаты указывают на то, что лен является отличным источником α-линоленовой кислоты (C18 ω3 ω-3), которая может быть использована для обеспечения диетических ω-3 ПНЖК с благотворным влиянием на здоровье животных и человека [3], [10]. Действительно, добавление к рациону свиноматок льна в любой форме (семена, шрот или масло) увеличивало концентрацию ω-3 ПНЖК в крови и молоке свиноматок и их поросят, усиливая их иммунный ответ и рост после отъема [7], [ 11].Есть также другие сообщения о том, что лен может влиять на развитие и рост иммунной системы [3], [10]. Camelina sativa, , обычно известная как камелина, или иногда «дикий лен» или «ложный лен», имеет такой же жировой состав, что и льняное семя [12], и, по-видимому, является потенциальной альтернативой льну. исключительно высокий уровень ω-3 / ω-6 жирных кислот (35–40%), белка (35–40%) и γ-токоферола [13] — [15]. Эта культура недавно стала привлекательной в качестве источника биотоплива; его масло дешевле, чем масло других культур [13], [16].Побочные продукты камелины (например, мука / жмыхи), полученные после экстракции масла из семян, являются важным побочным продуктом со значительной питательной ценностью [16], поскольку они богаты белком, незаменимыми аминокислотами, жирами и незаменимыми ω-3 и ω. -6 жирных кислот. Несколько исследований в области питания сообщили о возможности использования масла камелины и его побочных продуктов в рационе животных [17] — [19]. Потребление яиц от кур, питающихся диетами, содержащими муку из камелины, может обеспечить рацион человека более 300 мг / день ω-3 жирных кислот [14].Рационы, включающие либо семена верблюда (630 г / день, диета CS), либо мука из камелины (2 кг / день, диета CM), генерировали более высокую долю мононенасыщенных жирных кислот в молоке молочных коров голштинской породы, хотя они приводили к снижению жирность молока [20]. У свиней, особенно поросят, влияние ω-3 и ω-6 ПНЖК не изучалось широко, независимо от источников [1]. Добавление в рацион ω-3 ПНЖК может иметь положительный эффект, подавляя выработку воспалительных веществ [1].Кроме того, у свиней мало что известно о влиянии камелины (масла или жмыха) в качестве альтернативного источника ω-3 ПНЖК, и необходимы исследования, чтобы скорректировать их рацион питания специально для этого вида [16], [19]. ]. Считалось, что камелина может вызвать проблемы с питанием из-за ее содержания в эруковой кислоте и глюкозинолатах, но недавние исследования продемонстрировали химиозащитный и противораковый эффект гликозинолатов [19].

В настоящем исследовании потенциал 12% диетических жмыхов из камелины был исследован на свиньях на откорме и откорме, которые также используются в качестве животных моделей для оценки иммунного, метаболического и общего состояния здоровья.Эффект на медиаторы воспаления, молекулы сигнального пути и антиоксидантные детоксифицирующие ферменты в селезенке и плазме сравнивали с действием подсолнечного шрота, использованного в качестве контроля.

Материалы и методы

1. Опытный образец. Животные, рацион и отбор проб

В общей сложности 24 гибридных свиньи TOPIG со средней массой тела 68,45 ± 3,5 кг были разделены на две экспериментальные группы по 12 свиней в группе, содержались в загонах и получали изоэнергетический и изопротеический рационы пшенично-ячменный, содержащие 12% подсолнечного шрота. (контрольная обработка Т1) и 12% жмыхов из камелины (опытная обработка Т2) в течение 33 дней (Таблица 1).Камелина, используемая для приготовления лепешек, была произведена на поле Румынского сельскохозяйственного института Fundulea из румынского сорта Camelina sativa «Camelia» и любезно предоставлена ​​доктором Тонча после экстракции масла холодным давлением. Соответствующие методы лечения были разработаны для удовлетворения всех потребностей в питании растущих свиней на откорме (NRC, 1988). Свиньи получали ad libitum доступа к воде и корму и взвешивались индивидуально в начале и в конце испытания.Ежедневно регистрировали потребление корма на загон. Рассчитывали среднесуточный привес (ADG), среднесуточное потребление корма (ADFI) и соотношение привес-корм (G: F). В конце испытания (33d) образцы крови от 12 свиней в группе были асептически собраны в пробирки Vacutainer объемом 9 мл, содержащие 14,3 Ед / мл литиевого гепарина (Vacutest, Arzergrande, Италия), и центрифугированы при 775 × g в течение 25 минут. при 4 ° C. Полученную плазму использовали для определения концентраций иммуноглобулинов и цитокинов, биохимических параметров плазмы и антиоксидантной способности.Свиньи не получали корм до забора крови. Животных умерщвляли на 33 дня и образцы органов собирали на льду; Аликвоты селезенки (30–50 г) хранили при –80 ° C до анализа. За животными наблюдали дважды в день, и за ними ухаживали в соответствии с Законом Румынии 206/2004 об обращении и защите животных, используемых в экспериментальных целях, и в соответствии с Директивой Совета ЕС 98/58 / EC о защите сельскохозяйственных животных. Были приложены все усилия, чтобы минимизировать страдания. Протокол исследования был одобрен этическим комитетом Национального научно-исследовательского института питания и биологии животных, Балотешть, Румыния.

2. Анализ пищевых жирных кислот

Пробы корма были взяты в начале эксперимента и проанализированы на состав жирных кислот. Липиды экстрагировали метанолом-гексаном (ASRO-SR EN ISO 15304 / AC, 2005). Образцы анализировали с помощью газового хроматографа Perkin Elmer (Clarus 500, США), оснащенного инжектором (температура 250 ° C), пламенно-ионизационным детектором (температура 260 ° C) и капиллярной хроматографической колонкой BPX70 для метиловых эфиров жирных кислот (60 ° C). м × 0.Внутренний диаметр 25 мм × 0,20 мкм, Agilent, поток через колонку составлял 50 мл / мин, а коэффициент разделения составлял 1∶100). Температурная программа была следующей: повышение со 180 ° C до 220 ° C со скоростью 5 ° C / мин и поддержание в течение 7 минут, затем повышение до 220 ° C со скоростью 5 ° C / мин и поддержание в течение 10 минут. Общее время анализа 29 мин. Пики были идентифицированы путем сравнения их времен удерживания с индивидуальным эталонным стандартным раствором жирных кислот (метилированная смесь 37 компонентов FAMWE, SUPELCO, США и соевое масло, SUPELCO, США) (таблица 2 и таблица 3).

3. Измерение биохимических параметров плазмы

Концентрация глюкозы, общего холестерина, холестерина липопротеидов высокой плотности (холестерина ЛПВП), триглицеридов, общего белка, мочевины, Ca, Mg, Fe и активность щелочной фосфатазы (ALKP), глутаматпируваттрансаминазы (TGP) и глутамат оксалоида трансаминазы (TGO) определяли на автоматическом химическом анализаторе BS-130 (Bio-Medical Electronics Co., LTD, Китай) в плазме крови, собранной в конце эксперимента, а затем центрифугировали в течение 25 минут при 3500 × g. .

4. Измерение общих субпопуляций иммуноглобулинов плазмы (IgG, IgA, IgM)

Общую концентрацию подмножеств иммуноглобулинов (Ig) (G, A и M) измеряли с помощью ELISA (Bethyl, Medist, Montgomery, TX, USA) в плазме крови после разведения плазмы следующим образом: 1-4000 (IgA), 1–120 000 (IgG) и 1–10 000 (IgM), как сообщалось ранее [21], в соответствии с инструкциями производителя. Поглощение измеряли при 450 нм с помощью считывающего устройства для микропланшетов (Tecan Sunrise, Австрия).

5.Измерение антиоксидантной способности селезенки

Уровень антиоксиданта в ткани селезенки свиней, получавших контрольную диету из подсолнечника или жмыха из верблюжьего жмыха, измеряли с помощью набора общей антиоксидантной способности (TAC) (QuantiChrom — BioAssay Systems, США). Вкратце, замороженные образцы ткани селезенки (100 мг) были разрушены и гомогенизированы с использованием гомогенизатора Ultra-Turrax (IKA-Werke GmbH & Co. KG, Германия) и фосфатного буфера, содержащего 1% IGEPAL, 0,5% дезоксихолата натрия, 0,1% SDS и полного раствора. Таблетки для коктейлей с ингибиторами протеазы (без ЭДТА).Гомогенаты выдерживали 30 мин на льду, а затем центрифугировали при 10 000 × g при 4 ° C в течение 10 мин. 20 мкл лизата ткани селезенки или стандартный раствор Trolox плюс 100 мкл рабочего реагента добавляли в 96-луночный микропланшет, перемешивали постукиванием и инкубировали при комнатной температуре в течение 10 минут в соответствии с инструкциями производителя. Конечная точка поглощения считывалась при 570 нм с использованием считывающего устройства для микропланшетов (TECAN, Sunrise, Австрия).

6. ​​Измерение выработки оксида азота в селезенке

Уровень оксида азота (NO) в селезенке свиней, получавших контрольную диету из подсолнечника или жмыха из верблюжьего масла, измеряли для определения синтеза NO с помощью анализа Грисса, как описано ранее [22].После осаждения белка 100 мкл супернатанта смешивали с равным объемом реагента Грисса (1% сульфаниламида, 0,1% дигидрохлорида нафтилэтилендиамина и 2,5% фосфорной кислоты) и инкубировали при 37 ° C в течение 10 минут. Поглощение нитритов измеряли при 550 нм с использованием микропланшетного ридера (TECAN, Sunrise, Австрия) и стандартной кривой NaNO ₂ в диапазоне от 0 до 100 мкМ. Концентрация была рассчитана на основе диапазона NaNO ₂ , выраженного как мкмоль / л NO ₂ ^— .

7. Анализ экспрессии генов (КПЦР)

7.1 Экстракция общей РНК.

Замороженные образцы ткани селезенки (100 мг) разрушали и гомогенизировали в буфере RTL (QIAGEN GmbH, Германия) с использованием гомогенизатора Ultra-Turrax (IKA-Werke GmbH & Co. KG, Германия). Тотальную РНК экстрагировали с использованием набора Qiagen RNeasy midi (QIAGEN GmbH, Германия) в соответствии с рекомендациями производителя. После экстракции РНК обрабатывали ингибитором рибонуклеазы (RNasin Plus RNase Inhibitor; Promega Corp., США), а количество и качество экстрагированной тотальной РНК измеряли на спектрофотометре Nanodrop ND-1000 (Thermo Fischer Scientific, США). Целостность РНК проверяли электрофорезом в агарозном геле.

7.2 синтез кДНК.

После экстракции общей РНК из каждого образца селезенки кДНК генерировали с использованием набора M-MuLV Reverse Trascriptase (Fermentas, Thermo Fischer Scientific, США) в соответствии с протоколом производителя. Вкратце, в качестве исходного материала использовали 1 мкг общей РНК, для чего 0.Добавляли 5 мкг олиго (dT). РНК и олиго (dT) осторожно смешивали, затем центрифугировали и инкубировали при 65 ° C в течение 5 минут, охлаждали на льду, центрифугировали и снова помещали на лед. Далее к смеси добавляли 4 мкл 5X реакционного буфера, 2 мкл смеси dNTP (по 1 мМ каждого dNTP) и 2 мкл обратной транскриптазы MMuLV (40 ед.). Образцы инкубировали при 42 ° C в течение 60 мин, а реакцию инактивировали при 70 ° C в течение 10 мин.

7.3 Количественная ПЦР в реальном времени.

Флуоресцентная ПЦР в реальном времени использовалась для оценки про- и противовоспалительных маркеров (TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-8, IFN-γ, IL-4, COX2, iNOS, eNOS) экспрессии генов антиоксидантных ферментов (SOD, CAT, GPx1) и сигнальных молекул (PPAR-γ, MAPK p-38α, NF-κB).Реакции устанавливали в общем объеме 20 мкл с использованием 5 мкл кДНК (разведенных 1 × 10), 12,5 мкл Maxima SYBR Green / Fluorescein qPCR Master Mix 2X (Fermentas, Thermo Fischer Scientific, США), по 0,3 мкМ каждого гена специфический праймер (таблица 4) и проводили на аппарате Rotor-Gene-Q (QIAGEN GmbH, Германия). Условия цикла: предварительная обработка УДГ при 50 ° C в течение 2 минут, этап начальной денатурации при 95 ° C в течение 15 секунд, затем 40 циклов при 95 ° C в течение 15 секунд, 60 ° C в течение 15 секунд и 72 ° C. в течение 15 с при однократном измерении флуоресценции; заключительную стадию удлинения проводили при 72 ° C в течение 10 мин.Специфичность продуктов ПЦР подтверждали анализом кривой диссоциации. Программа кривой плавления состояла из температур от 60 до 95 ° C со скоростью нагрева 0,1 ° C / с и непрерывным измерением флуоресценции. Все образцы были измерены в трех экземплярах. Относительные уровни продукта были определены количественно с использованием метода 2 ^{(-ΔΔ C} _q ⁾ [23]. Для нормализации данных использовали средний уровень экспрессии двух эталонных генов, циклофилина А и βактина.Эти эталонные гены были экспериментально подтверждены для клеток типа IPEC-1, и отсутствие лечебного эффекта и вариации экспрессии были критериями отбора для эталонных генов. Результаты выражали как относительное кратное увеличение или уменьшение для необработанных контрольных клеток.

8. Обнаружение цитокиновых белков (ELISA)

Концентрация цитокинов (IL-8, IL1-β, IL-6, TNF-α, IL-4 и IFN-γ) измерялась как в плазме крови, так и в селезенке (d33). Образцы ткани селезенки взвешивали и гомогенизировали в фосфатном буфере, содержащем 1% IGEPAL, дезоксихолат натрия 0.5%, SDS 0,1% и полный коктейль из ингибиторов протеазы (без ЭДТА). Гомогенаты выдерживали 30 мин на льду, а затем центрифугировали при 10 000 × g при 4 ° C в течение 10 мин. Образцы плазмы использовали неразбавленными для определения ELISA. Концентрации цитокинов в тканевых супернатантах и ​​плазме определяли с помощью ELISA с использованием имеющихся в продаже наборов (R&D Systems, Minneapolis, MN 55413, USA) в соответствии с инструкциями производителя. Очищенные фракции антител против свиных цитокинов IL-8 (MAB5351), TNF-α (MAB6902), IL-1β (MAB6811), IL-6 (MAB686), IL-4 (ASC0944) и IFN-γ (ASC4934) (R&D Systems, Миннеаполис, США и Biosource International, Inc., Камарилло, США) использовались в качестве захватывающих антител в сочетании с биотинилированными цитокинами против свиней IL-8 (BAF535), TNF-α (BAF690), IL-1β (BAF681), IL-6 (BAF686), IL-4. (ASC0849), IFN-γ (ASC4839). Для обнаружения использовали стрептавидин-HRP (Biosource, Камарилло, США) и TMB (тетраметилбензидин). Оптические плотности измеряли на микропланшетном ридере для ELISA (Tecan, SunRise, Австрия) при 450 нм. Разведения рекомбинантных свиных IL-8, TNF-α, IL-1β, IL-4 и IFN-γ использовали в качестве стандартов, и данные анализировали относительно линейной части полученной стандартной кривой.Результаты выражали в пикограммах (пг) цитокина / мл плазмы или пг цитокина / 1 мг белка селезенки. Общий белок селезенки количественно определяли с использованием бычьего сывороточного альбумина в качестве стандарта (Pierce BCA Protein Assay Kit, Thermo Fischer Scientific, США).

9. Иммуноблоттинг-анализ

Уровни экспрессии фосфорилированного белка MAPK-p38α и NF-κB p65 анализировали с помощью вестерн-иммуноблоттинга с использованием кроличьих антител против свиного фосфо-MAPK-p38 (Thr180 / Tyr182) и кроличьих антител против свиного фосфо-NF-κB p65 (Cell Signaling Technology, Данверс, Массачусетс, США) разбавлено 1200.Кроличьи антитела против β-актина (Cell Signaling Technology), разведенные 1-500, использовали в качестве контроля. Лизаты селезенки получали из 2 г замороженной селезенки, гомогенизированной в буфере RIPA для фосфо-MAPK-p38α, как описано ранее [24], и в фосфатном буфере, модифицированном RIPA для фосфо-NF-κB [25], и определяли количественное содержание общего белка, с использованием коммерческого набора (Pierce BCA Protein Assay Kit, Thermo Fischer Scientific, США). Затем 30 мкг общих белков разделяли на 10% SDS-PAGE и переносили на нитроцеллюлозные мембраны.Мембраны блокировали в течение ночи трис-буферным физиологическим раствором (pH 7,5), 5% BSA и зондировали первичным антителом в течение 2 часов при комнатной температуре. После пятикратной промывки TBS, содержащим 0,1% Tween 20 (TBST), блоты инкубировали с 1-2000 вторичных антител IgG, конъюгированных с хреном (Cell Signaling Technology), в течение 1 часа и еще трижды промывали TBST. Экспрессию белка детектировали с использованием хемилюминесцентного субстрата ECL (Bio-Rad Laboratories, США) в соответствии с инструкциями производителя.Интенсивность сигналов оценивали с использованием хемилюминесцентного имидж-сканера MicroChemi 4.2 (DNR Bio-Imaging Systems Ltd., Израиль) и программного обеспечения GelQuant 1D (DNR Bio-Imaging Systems Ltd., Израиль). Результаты выражали как соотношение между уровнем фосфорилирования киназы p38-MAP и NF-κB и уровнем экспрессии β-актина.

10. Статистический анализ

Все данные выражены как среднее ± стандартная ошибка среднего (SEM). Для исследования статистических различий между группами по всем анализируемым параметрам был проведен односторонний анализ ANOVA.Дальнейшие различия между средними значениями определяли методом наименьших квадратов разности Фишера. Статистический анализ данных проводился с помощью программного обеспечения Statview 5.0 (SAS Institute Inc, Кэри, Северная Каролина), и значения P <0,05 считались значимыми. Коэффициент корреляции Пирсона был использован для установления взаимосвязи между экспрессией генов (g ₁ , g ₂ ) ядерных рецепторов PPARγ и NF-κB, передачей сигналов MAPK-p38α, молекул, связанных с воспалением, и ферментов антиоксидантной защиты в селезенке свиней, которых лечили диетическими жмыхами из камелины.Статистический анализ проводился с помощью программного обеспечения R (http://www.r-project.org/).

Результаты

1. Состав пищевых жирных кислот

Состав жирных кислот, представленный в Таблице 2, показывает более высокое содержание ω-3 ПНЖК в жмыхах из камелины по сравнению с подсолнечным шротом, 33,36 против 0,16 (Таблица 2). Включение в рацион жмыхов из камелины увеличивало содержание ω-3 ПНЖК в экспериментальной диете (6,40 против 1,95) и приводило к снижению соотношения ω-6 / ω-3 ПНЖК с 25.От 45 до 6,82 (таблица 3).

2. Производительность

Свиньи, получавшие рационы Т1 или Т2 в течение 33 дней, казались клинически нормальными в течение всего экспериментального периода. В конце эксперимента по кормлению ни средний дневной привес (0,866 кг / свинья / день, группа Т1 против , 0,836 кг / свинья / день, группа Т2, P = 0,592), ни суточное потребление корма (3,31 кг / свинья Группа / день T1 против 3,03 кг / свинья / день группа T2, P = 0,456), ни соотношение корм: привес (3,82 против 3,62, P = 0,696) не зависели от диетического лечения (данные не показаны).

3. Влияние жмыха из жмыха на биохимический профиль плазмы и концентрацию иммуноглобулинов

Свиньи на диете из камелиновых лепешек имели значительное снижение (18,47%) концентрации глюкозы в плазме (68,68 мг / дл) по сравнению со свиньями на диете T1 (84,24 мг / дл, P = 0,018). Другие составляющие биохимии плазмы, а также концентрация неспецифических субпопуляций иммуноглобулинов (IgM, IgA, IgG) не зависели от диетического лечения камелинами; наблюдаемые различия были незначительными по сравнению с группой Т1.Однако тенденция к снижению концентрации холестерина, хотя и не являющаяся статистически значимой для продолжительности этого 33-го эксперимента, была выявлена ​​в плазме свиней, получавших рацион с жмыхами из верблюжьего жмыха (таблица 5 и таблица 6).

4. Влияние жмыхов камелиновых на антиоксидантную способность селезенки и синтез оксида азота

Оценивали влияние диеты на жмыхах из верблюжьего жмыха на общий антиоксидантный статус и продукцию NO в селезенке свиней. Результаты показали статистически значимое увеличение общего ОДУ (1060.35 против 911,55, P = 0,002) и NO (47,31 против 28,7, P = 0,053) в селезенках свиней, получавших в течение 33 дней диету с жмыхами из камелины (Рисунок 1 и Рисунок 2).

Рис. 1. Влияние жмыхов из камелины на антиоксидантную способность селезенки.

Уровень антиоксиданта в образцах селезенки, взятых от свиней, которых кормили жмыхами верблюда или контроля, измеряли с помощью набора антиоксидантной способности (TAC) (QuantiChrom — BioAssay Systems, США). Результаты выражаются в эквиваленте антиоксидантной способности Trolox.Данные представляют собой средние значения ± SEM. Односторонний тест ANOVA с последующим тестом Фишера был проведен для анализа влияния различных обработок на уровень TEAC (* P <0,05, контрольная группа диеты Т1 (белый столбец) по сравнению с группой диеты Т2-камелина (серый столбец).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0110186.g001

Рис. 2. Влияние жмыхов из камелины на продукцию NO в селезенке.

Синтез NO определяли путем измерения уровня оксида азота в селезенке свиней, которых кормили или не кормили жмыхами из камелинового масла, с использованием анализа Грисса.Поглощение нитритов измеряли при 550 с использованием считывающего устройства для микропланшетов (Tecan Infinite 200Pro, Австрия) и стандартной кривой NaNO ₂ в диапазоне от 0 до 100 мкМ. Концентрации рассчитывались на основе диапазона NaNO ₂ , выраженного как мкмоль / л NO ₂ ^— . Значения представляют собой средние значения ± SEM для двух повторов. Статистический анализ выполняли с использованием однофакторного дисперсионного анализа с последующим тестом Фишера (* P <0,05, контрольная группа диеты Т1 (белый столбец) по сравнению с группой диеты Т2-камелина (серый столбец).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0110186.g002

5. Влияние диетических жмыхов из верблюжьего масла на концентрацию белка и экспрессию гена мРНК маркеров воспаления в селезенке и плазме

Способность диеты из жмыха верблюда модулировать экспрессию генов цитокинов и продукцию цитокинов исследовали в селезенке и плазме после 33 дней лечения. Регуляторные (IL-4 и IFN-γ) и провоспалительные (TNF-α, IL-8, IL-6, IL-1β) цитокины измеряли с помощью количественной ПЦР и ELISA.Как показано на Фигуре 3, диета из жмыхов из верблюжьего масла вызвала снижение (P <0,05) мРНК TNF-α, IL-8, IL-1β и IL-6 по сравнению с диетой T1 и не оказала влияния на IFN- γ. Результаты количественной ПЦР для других медиаторов воспаления показали, что диета с жмыхами из верблюжьего жмыха также привела к значительному (P <0,00001) снижению мРНК COX2 и увеличению мРНК iNOS и eNOS (в 5,18 и 2,74 раза соответственно) (Рисунок 4). В противоположность этому, экспрессия мРНК, кодирующей IL-4, значительно (в 2,32 раза) увеличилась в образцах селезенки свиней, получавших рацион из жмыхов из верблюжьей коры (рис. 3).Как и ожидалось, аналогичное влияние на профиль цитокинов (TNF-α, IL-8, IL-1β и IL-6) на уровне белка было выявлено в селезенке, за исключением концентрации IL-4 (Таблица 7). На системном уровне в плазме выявлялись только IFN-γ и IL-4; диета с жмыхами из верблюжьей жмыха увеличивала концентрацию белка IL-4 и вызывала небольшое снижение цитокинов IFN-γ (таблица 7).

Рис. 3. Влияние жмыхов из верблюжьего масла на экспрессию цитокинов селезенки.

Свиньи получали два разных диетических жира: рацион Т1 (подсолнечное масло) и рацион Т2 (жмыхи верблюда).Образцы селезенки отбирали на 33 день лечения и анализировали на экспрессию мРНК цитокинов с помощью количественной ОТ-ПЦР. Результаты выражаются в виде кратного изменения после нормализации экспрессии гена-мишени цитокина до среднего значения 2 внутренне экспрессируемых эталонных генов. Значения представляют собой средние значения ± SEM для двух повторов. Статистический анализ выполняли с использованием однофакторного дисперсионного анализа с последующим тестом Фишера (* P <0,05, контрольная группа диеты Т1 (белый столбец) по сравнению с группой диеты Т2-камелина (серый столбец).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0110186.g003

Рис. 4. Влияние жмыха из камелинового жмыха на экспрессию маркеров воспаления в селезенке.

Образцы селезенки были взяты в конце испытания на 33-й день и проанализированы на экспрессию мРНК COX-2, iNOS и eNOS с помощью количественной ОТ-ПЦР. Результаты выражены как кратное изменение после нормализации экспрессии целевого гена до среднего значения экспрессии 2 внутренних эталонных генов. Значения представляют собой средние значения ± SEM для двух повторов.Статистический анализ проводился с использованием однофакторного дисперсионного анализа с последующим тестом Фишера (* P <0,05, контрольная группа диеты Т1 (белый столбец) по сравнению с группой диеты Т2-камелина (серый столбец).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0110186.g004

6. ​​Влияние диетических жмыхов из камелины на экспрессию генов сигнальных молекул PPARγ, MAPK-p38α и NF-κB в селезенке

Экспрессия генов ядерных факторов PPARγ и NF-κB, MAPK-p38α и сигнальных молекул, связанных с синтезом цитокинов и воспалением, представлена ​​на рисунке 5.Наши результаты показали значительное увеличение PPARγ в 3,53 раза в селезенке свиней, получавших рацион из жмыхов из камелины (P <0,0001). Между тем, экспрессия NF-κB и MAPK-p38α снизилась в 1,41 и 3,83 (P <0,02) раза соответственно.

Рис. 5. Влияние жмыхов камелины на экспрессию сигнальных молекул в селезенке.

Образцы селезенки были взяты в конце испытания на 33-й день и проанализированы на экспрессию мРНК PPAR-γ, NF-κB, MAPK-p-38α и Nrf2 с помощью количественной ОТ-ПЦР.Результаты выражаются как изменение после нормализации экспрессии целевого гена до среднего значения экспрессии 2 внутренних эталонных генов. Значения представляют собой средние значения ± SEM для двух повторов. Статистический анализ проводился с использованием однофакторного дисперсионного анализа с последующим тестом Фишера (* P <0,05, контрольная группа диеты Т1 (белый столбец) по сравнению с группой диеты Т2-камелина (серый столбец).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0110186.g005

Иммуноблот-анализ показал, что фосфорилированные активные формы MAPK-p38α и NF-κB были значительно уменьшены (45.53% и 80,43% соответственно, P <0,001) в образцах селезенки, взятых у животных, получавших диету из жмыхов из верблюжьей коры (рисунки 6 и 7).

Фиг. 6. Экспрессия фосфо-MAPK-p38α в протеиновом лизате селезенки.

Уровень фосфорилирования MAP-киназы p38α в селезенке свиней, получавших или не получавших жмыхи верблюда, определяли вестерн-блоттингом и выражали как соотношение между интенсивностями полос фосфо-MAPK-p38α и β-актина соответственно. Для каждой группы животных были рассчитаны средние значения ± SEM и представлены в виде гистограммы.Статистический анализ проводился с использованием однофакторного дисперсионного анализа с последующим тестом Фишера (* P <0,05, контрольная группа диеты Т1 (белый столбец) по сравнению с группой диеты Т2-камелина (серый столбец).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0110186.g006

Рисунок 7. Экспрессия фосфо-p65 NF-κB в белковом лизате селезенки.

Уровень фосфорилирования p65-NF-kB в селезенке свиней, которых кормили или не кормили жмыхами верблюда, определяли вестерн-блоттингом и выражали как соотношение между интенсивностями полос фосфо-p65 NF-κB и β-актина соответственно.Для каждой группы животных были рассчитаны средние значения ± SEM и представлены в виде гистограммы. Статистический анализ проводился с использованием однофакторного дисперсионного анализа с последующим тестом Фишера (* P <0,05, контрольная группа диеты Т1 (белый столбец) по сравнению с группой диеты Т2-камелина (серый столбец).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0110186.g007

7. Влияние жмыха из камелинового жмыха на экспрессию генов антиоксидантных ферментов в селезенке

Влияние диеты Т2 на экспрессию генов компонентов системы антиоксидантной защиты, таких как CAT, SOD и GPx1, оценивали в селезенке.Результаты показали, что экспрессия мРНК этих ферментов значительно увеличилась в селезенке свиней, которых кормили жмыхами из камелины: в 2,27 (SOD), 3,29 (CAT) и 1,66 (GPx1) раза, соответственно (фиг. 8).

Рис. 8. Влияние жмыхов из верблюжьей жмыха на экспрессию антиоксидантных ферментов.

Образцы селезенки были взяты в конце испытания на 33-й день и проанализированы на экспрессию мРНК SOD, CAT и GPx с помощью количественной ОТ-ПЦР. Результаты выражены как кратное изменение после нормализации экспрессии целевого гена до среднего значения экспрессии 2 внутренних эталонных генов.Значения представляют собой средние значения ± SEM для двух повторов. Статистический анализ проводился с использованием однофакторного дисперсионного анализа с последующим тестом Фишера (* P <0,05, контрольная группа диеты Т1 (белый столбец) по сравнению с группой диеты Т2-камелина (серый столбец).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0110186.g008

8. Корреляция между экспрессией генов ядерных рецепторов, сигнальных молекул, маркеров воспаления и ферментов антиоксидантной защиты в селезенке свиней, питавшихся жмыхами из камелины

Чтобы лучше понять механизм действия ПНЖК, были установлены математические корреляции между экспрессией ядерных рецепторов, сигнальных молекул, маркеров, связанных с воспалением, и ферментов антиоксидантной защиты в образцах селезенки, полученных от свиней, получавших рационы Т1 или Т2 верблюда.Высоко значимые отрицательные корреляции были получены между экспрессией гена PPAR-γ и провоспалительными маркерами (IL-8: R ² = -0,72, TNF-α: R ² = -0,55 и IL-1β: R ² = -0,65), а также между PPAR-γ и геном, кодирующим COX-2 (R ² = -0,64). PPAR-γ сильно коррелировал с экспрессией антиоксидантных ферментов (GPx: R2 = 076, SOD: R2 = 0,71 и CAT: R2 = 0,85). Как и ожидалось, NF-κB и MAPK-p38α отрицательно коррелировали с PPAR-γ и положительно коррелировали с экспрессией провоспалительного маркера (TNF-α: R ² = 0.55; ИЛ-8: R ² = 0,51). Также была обнаружена отрицательная корреляция между антиоксидантными ферментами и провоспалительными маркерами (рис. 9).

Рисунок 9. Корреляция между экспрессией генов в селезенке.

Процедура коэффициента корреляции Пирсона была использована для установления взаимосвязи между экспрессией генов ядерных рецепторов PPARγ, NF-κB и сигнальным p38-MAPK, молекулами, связанными с воспалением, и ферментами антиоксидантной защиты в селезенке свиней, получавших диетические лепешки из верблюда.Градиент красного и зеленого цвета от темного к светлому показывает степень положительной или отрицательной корреляции, соответственно, в селезенке свиней, получавших или не получавших диету из камелины.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0110186.g009

Обсуждение

Кормление свиней на откорме на откорме (33d) кормовыми жмыхами не повлияло на потребление корма, средний привес или эффективность корма. Эти результаты согласуются с другими сообщениями о камелине [17], [26] — [28] или других источниках ПНЖК у животных с однокамерным желудком или жвачных [9], [29].Однако, как и в других исследованиях ПНЖК, мы обнаружили значительное снижение (P <0,05) концентрации глюкозы в плазме крови свиней, получавших рацион из жмыхов из верблюжьего жмыха. Полиненасыщенные жирные кислоты, особенно ω-3 ПНЖК, являются естественными регуляторами поглощения глюкозы in vivo, причем являются потенциальными лигандами и регуляторами транскрипционного фактора PPAR-γ, члена суперсемейства ядерных гормональных рецепторов [30]. PPAR-γ, в свою очередь, регулирует экспрессию генов и метаболические процессы, такие как гликолиз, биосинтез липидов, удлинение жирных кислот, десатурация и окисление [31].Было показано, что активаторы PPAR-γ (т.е. тиазолидиндионы) широко используются при лечении диабета 2 типа [32]. В этом исследовании диета T2 значительно увеличила экспрессию мРНК PPAR-γ и снизила концентрацию глюкозы в плазме крови (84,24 против 68,68 мг / дл, P = 0,018). В настоящее время ПНЖК используются при лечении диабета из-за их способности снижать уровень глюкозы в крови, способствовать лучшей толерантности к глюкозе и уменьшать опасности, связанные с воспалением [30], [33] — [35].Однако Burri et al. (2011) подтвердили, что влияние на уровень глюкозы зависит от формы этерификации ω-3 ПНЖК, особенно эйкозапентаеновой кислоты (EPA) и докозагексаеновой кислоты (DHA), до фосфолипидов или триглицеридов, которые могут оказывать различное воздействие. ответ [31]. Например, уровень глюкозы снижался маслом криля (ω-3 ПНЖК, этерифицированные во фракцию фосфолипидов) у мышей и повышался маслом канолы в крысах или рыбьим жиром у человека [31], [36] — [38]. С другой стороны, никакого влияния на уровень глюкозы в плазме крови у свиней, получавших рационы, богатые ω-3 жирными кислотами, также не наблюдалось [7], [39], [40].Было высказано предположение, что переменное влияние рыбьего жира на гликемический контроль может быть вызвано различиями в чувствительности к инсулину между субъектами [41]. Однако необходимы дополнительные исследования, чтобы выяснить эффект снижения уровня глюкозы ω-3 ПНЖК в профилях сыворотки. ПНЖК также участвуют в метаболизме липидов, по-разному регулируя их (повышая или понижая) в зависимости от источника ПНЖК [31]. Различные эффекты ПНЖК на метаболическом уровне были также отмечены для липидов [31], [42], [43].В настоящем исследовании тенденция к снижению концентрации холестерина в плазме в течение 33 дней была выявлена ​​у свиней, которых кормили жмыхами из верблюжьего жмыха.

Потребление ПНЖК связано с модулирующим действием на экспрессию и секрецию важных маркеров воспаления, таких как цитокины и хемокины, у людей и свиней. Например, потребление рациона, обогащенного рыбьим и льняным маслами, снижает провоспалительные цитокины (IL-1, IL-6 и TNF-α) и экспрессию молекул адгезии [44], [45] у людей, в то время как исследования проводились. на мышах выявлено либо стимулирующее, либо ингибирующее действие ω-3 жирных кислот на провоспалительные цитокины [4].Жан и его коллеги показали, что рацион, обогащенный 10% льняного семени, способен линейно снижать (во время периода кормления) экспрессию генов этих цитокинов в мышцах, селезенке и жировой ткани у откормочных свиней при нормальных физиологических условиях [10]. В этом исследовании кормление 12% -ным рационом жмыхов из верблюжьего масла (дикого льняного семени) вырабатывало значительно меньше IL-1β, TNF-α, IL-6 и IL-8 как на уровне мРНК, так и на уровне белка в селезенке, также при нормальных физиологических условиях. условия. Наши результаты показывают, что жмыхи из камелины по их активным соединениям, ω-3 жирным кислотам и другим антиоксидантам (токоферол и др.)) может модулировать сдвиг между балансом цитокинов Th2 / Th3. Он является супрессором цитокинов Th2-типа за счет снижения экспрессии провоспалительных генов и индуктором цитокинов Th3-типа за счет увеличения экспрессии гена IL-4. Индукция или подавление того или иного типа этих цитокинов может использоваться в различных стратегиях нутритивного лечения с важными иммунологическими последствиями.

На основании литературных данных существуют различные механизмы, с помощью которых ненасыщенные жирные кислоты могут подавлять синтез провоспалительных цитокинов.ω-3 ПНЖК могут оказывать свое влияние на эти иммунные медиаторы, действуя непосредственно на внутриклеточные сигнальные пути, что приводит к активации или инактивации нескольких ядерных транскрипционных факторов (PPAR-γ, NF-κB), участвующих в регуляции иммунного ответа, в частности при воспалении [10], [46], [47]. В нашем исследовании значительное увеличение экспрессии гена PPAR-γ наблюдалось в селезенке свиней, которых кормили жмыхами из верблюжьего жмыха. Стимулирующий эффект льняной диеты на ген PPAR-γ был также обнаружен Zhan и его коллегами на откорме свиней [10].Эти авторы сообщили об отрицательной корреляции между экспрессией PPAR-γ и экспрессией провоспалительных цитокинов в мышцах и селезенке и предположили, что диетические ω-3 PUFA из льняного семени могут ингибировать провоспалительные медиаторы путем активации PPAR-γ. PPAR-γ является членом суперсемейства ядерных гормональных рецепторов, которое регулирует иммунный ответ, подавляя передачу сигналов NF-κB и продукцию воспалительных цитокинов [7]. В нашем исследовании были обнаружены значительные отрицательные линейные корреляции между экспрессией PPAR-γ и экспрессией воспалительных цитокинов.Снижение экспрессии NF-κB и MAPK-p38α также наблюдалось в селезенке свиней, получавших ПНЖК из жмыхов верблюда. Недавние исследования [8] показывают, что ингибирование NF-κB ПНЖК также может быть опосредовано активацией рецептора 120, сопряженного с G-белком (GPR 120), который функционирует как рецептор PUFA. Стимуляция GPR120 ингибирует TAK-1 (трансформирующий фактор роста-β-активируемую киназу-1), вышестоящий активатор провоспалительных сигнальных путей MAPK (JNKs и MAPK-p38α) и NF-κB, подавляя тем самым воспаление ткани.Кроме того, некоторые ω-3 жирные кислоты могут влиять на активность ядерных рецепторов, влияя на их состояние фосфорилирования [9], [49], [50]. Наш иммуноблот-анализ показал, что уровень фосфорилирования MAPK-p38α и NF-κB был значительно снижен (54,47%, P <0,06 и 19,57% соответственно) в образцах селезенки, взятых у животных, получавших диетические жмыхи из верблюжьего масла (рис. Рисунок 7) по сравнению с контролем.

Вышеупомянутые авторы предположили, что ω-3 PUFA может оказывать противовоспалительное действие за счет активации неопределенного нерва, что приводит к ингибированию NF-κB и активации молекулы STAT3.Фосфорилирование STAT3 увеличивает экспрессию SOCS3 (супрессор передачи сигналов цитокинов 3), что, в свою очередь, ингибирует синтез цитокинов [48]. Эти механизмы в основном возникают в макрофагах, которых много в селезенке. Однако для выяснения этих механизмов необходимы дополнительные исследования.

ПНЖК влияют на экспрессию и активацию многих других медиаторов воспаления [51]. Как и ожидалось, данные кПЦР выявили значительное снижение экспрессии гена COX2 под действием диеты из камелины и, что интересно, значительное увеличение мРНК iNOS и eNOS.Большинство исследований ненасыщенных жирных кислот показали снижение экспрессии iNOS и активности NADPH [52], [53], но этот специфический регуляторный эффект присущ не всем жирным кислотам. Некоторые из них и другие пищевые фитохимические вещества являются ингибиторами COX2 и активаторами iNOS [54]. Например, арахидоновая (ω-6) и эйкозапентаеновая (ω-3) жирные кислоты, экстракт эхинацеи и несколько фенолов индуцировали повышенную экспрессию гена iNOS [55], [51], [56]. Было высказано предположение, что лежащий в основе механизм не зависит от пути ЦОГ и NF-κB и цитокинов (IL-1, TNF-α и IFN-γ), а опосредуется протеинкиназой C и тирозинкиназой [55].Напротив, регуляция транскрипции iNOS опосредуется увеличением NO через отрицательную обратную связь, которая ингибирует связывание NF-κB с ДНК [51]. Повышенный синтез NO в селезенке также был вызван диетой из жмыха из камелины в нашем исследовании.

Влияние ПНЖК на окислительный стресс недостаточно изучено [39]. По мнению некоторых исследователей, рационы, богатые рыбьим жиром, могут вызывать окислительное повреждение у людей и животных из-за высокого уровня ненасыщенности в молекулярной структуре ПНЖК, в то время как другие продемонстрировали, что диетический рыбий жир обладает антиоксидантным действием [33].Например, антиоксидантная способность плазмы и активность основных антиоксидантных ферментов SOD, GPx1, CAT, были увеличены с помощью диетических ω-3 ПНЖК (особенно EPA и DHA) у крыс [57], [58], [59]. Эти результаты совпадают с результатами, наблюдаемыми в настоящем исследовании, в котором мы обнаружили значительное увеличение экспрессии мРНК SOD, CAT, GPx1 и общей антиоксидантной способности плазмы. Изучая способность богатого ω-6 / ω-3 ПНЖК ферментированного пшеничного порошка (Lisosan G) модулировать антиоксидантные и детоксифицирующие ферменты, Ла Марка и его коллеги [60] обнаружили увеличение экспрессии генов и активности нескольких антиоксидантных / детоксифицирующих ферментов, и идентифицировали лежащий в основе молекулярный механизм, который определяет антиоксидантные свойства ненасыщенных жирных кислот, связанных с активацией Nrf2 и ингибированием NF-κB [60].Meadus и его коллеги [19] предположили, что увеличение экспрессии генов детоксифицирующих ксенобиотики ферментов CyPb1, Aldh3, TST и GstM1 фазы 2 в печени свиньи было вызвано едой камелины через ее глюкозинолаты, глюкокамелин (метилсульфинилдецилизотиоцианаты), которые способны индуцировать Nrf2. активация [19]. Nrf2 — это транскрипционный фактор, играющий важную роль в индукции антиоксидантных ферментов, обеспечивающих защиту от окислительного стресса [61], [62]. Многие примеры показали, что пути Nrf2 и NF-κB вмешиваются в контроль транскрипции или функции нижестоящих белков-мишеней.Перекрестные разговоры между разными членами этих двух семейств белков варьируются от прямого воздействия на факторы транскрипции до белок-белковых взаимодействий [63], [60]. На крысах было показано, что диета, дополненная множеством антиоксидантов, снижает рост окислительного стресса с одновременным ингибированием NF-κB [64]. С другой стороны, было показано, что сверхэкспрессия антиоксидантных ферментов, других антиоксидантов или фармакологических ингибиторов NF-κB и MAPK-p38α подавляет экспрессию Nrf2 [65].В нашем исследовании экспрессия гена Nrf2 была значительно снижена за счет диеты с камелинами в селезенке.

Доказано, что гуморальный иммунный ответ модулируется ω-3 ПНЖК. Например, добавление к пище рыбьего жира снижает выработку антител у мышей [66] и людей [67]. Однако Chang и его коллеги [68] сообщили, что масла ω-3 PUFA повышают уровень неспецифического IgE в сыворотке мышей BALB / c и снижают уровень неспецифических IgA и OVA-специфических IgG1 [64]. Концентрация антител против OVA была выше у свиноматок и их поросят, получавших диетическое льняное семя и льняную муку, чем у животных, получавших диету с добавлением льняного масла [7], что позволяет предположить, что эффект может различаться в зависимости от формы питания: семена, лепешки, мука. или масло.В настоящем исследовании диета из камелины не оказывала никакого влияния на IgA, IgM и IgG.

Заключение

Наши результаты, вместе взятые, показывают, что диета, включающая жмыхи из верблюжьего масла, не влияла на продуктивность свиней, но модулировала несколько медиаторов клеточного иммунного ответа (снижение провоспалительных цитокинов и COX2), систему антиоксидантной защиты (увеличение экспрессии антиоксидантных ферментов, Производство SOD, CAT, GPx и NO) в селезенке. Кроме того, диета с жмыхами из камелины улучшила профиль биохимии крови: снижение уровня глюкозы в плазме и повышение антиоксидантной способности плазмы.Все эти результаты показывают, что побочные продукты масла камелины, богатые ω-3 ПНЖК, обладают способностью модулировать системный метаболизм и влиять на функцию клеток селезенки. Таким образом, Camelina может быть альтернативой другим масличным семенам в качестве источника ω-3 ПНЖК и других антиоксидантов, которые можно дополнительно регулировать с помощью определенных диетических стратегий. При таком уровне включения (12%) жмыхи из верблюжьей жмыхи, по-видимому, являются потенциально альтернативным источником жира для свиней, сохраняя высокое содержание ω-3 ПНЖК. Его антиоксидантный потенциал проявляется в стимуляции экспрессии генов детоксицирующего фермента и в подавлении провоспалительных маркеров в селезенке.Более того, недавние исследования на свиньях показали, что некоторые из компонентов камелины (эруковая кислота и глюкозинолаты), рассматриваемые как антипитательные факторы, которые ограничивают ее использование, могут иметь антиканцерогенные свойства, стимулируя экспрессию в печени фаз 1 и 2, детоксифицирующих ксенобиотики. ферменты.

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: IT MH. Проведены эксперименты: MG GCP MM DM NL MR. Проанализированы данные: IT MG GCP. Участвовал в написании рукописи: IT.

Список литературы

1. 1. Moller S, Lauridsen C (2006) Состав пищевых жирных кислот, а не добавление витамина E, влияет на цитокиновый и эйкозаноидный ответ ex vivo альвеолярных макрофагов свиньи. Цитокин 35: 6–12.
2. 2. Calder PC, Yaqoob P, Thies F, Wallace FA, Miles EA (2001) Жирные кислоты и функции лимфоцитов. Br J Nutr 87 (Suppl1): S31 – S48.
3. 3. Barcelo-Coblijn G, Murphy EJ (2009) Альфа-линоленовая кислота и ее преобразование в жирные кислоты n-3 с более длинной цепью: преимущества для здоровья человека и роль в поддержании уровня жирных кислот n-3 в тканях.Прогресс в исследованиях липидов 48: 355–374.
4. 4. Calder PC (1996) Лекция, посвященная медали сэра Дэвида Катбертсона. Иммуномодулирующее и противовоспалительное действие полиненасыщенных жирных кислот n-3. Proc Nutr Soc 55: 737–774.
5. 5. Пилевар М., Аршами Дж., Голиан А., Басами М.Р. (2011) Влияние диетического соотношения n-6: n-3 на иммунную и репродуктивную системы цыплят-молодок. Poult Sci 90: 1758–1766.
6. 6. de Quelen F, Boudry G, Mourot J (2010) Льняное масло в рационе матери повышает статус длинноцепочечных ПНЖК у плода и новорожденного в период сосания у свиней.Br J Nutr 104: 533–543.
7. 7. Фермер С., Жигер А., Лессард М. (2010) Пищевые добавки с различными формами льна на поздних сроках беременности и кормления грудью: влияние на продуктивность свиноматок и помета, эндокринологию и иммунный ответ. J Anim Sci 88: 225–237.
8. 8. Eder K, Brandsch C (2002) Влияние жирнокислотного состава рапсового масла на липиды плазмы и окислительную стабильность липопротеинов низкой плотности у хомяков, получавших холестерин. Европейский журнал липидной науки и технологии 104: 3–13.
9. 9. Умедзава М., Такеда Т., Когиси К., Хигучи К., Матусита Т. и др. (2000) У мышей с ускоренным старением концентрация липидов в сыворотке и средняя продолжительность жизни модулируются диетическими полиненасыщенными жирными кислотами. Журнал питания 130: 221–227.
10. 10. Zhan ZP, Huang FR, Luo J, Dai JJ, Yan XH и др. (2009) Продолжительность кормления льняной диетой влияет на экспрессию генов, связанных с воспалением, и показатели роста курганов выращивания-откорма. J Anim Sci 87: 603–611.
11. 11. Фермер С., Пети Х.В. (2009) Влияние пищевых добавок с различными формами льна на поздних сроках беременности и в период лактации на профили жирных кислот у свиноматок и их поросят. J Anim Sci 87: 2600–2613.
12. 12. Woods VB, Fearon AM (2009) Диетические источники ненасыщенных жирных кислот для животных и их перенос в мясо, молоко и яйца: обзор. Животноводство 126: 1–20.
13. 13. Cherian G (2012) Camelina sativa в рационах птицы: возможности и проблемы.В: Маккар Х.С., редактор. Побочные продукты биотоплива в качестве корма для скота: возможности и проблемы. Рим: ФАО. С. 303–310.
14. 14. Cherian G, Campbell A, Parker T (2009) Качество яиц и липидный состав яиц кур, которых кормили Camelina sativa. Журнал прикладных исследований птицеводства 18: 143–150.
15. 15. Zubr J, Matthaus B (2002) Влияние условий роста на жирные кислоты и токоферолы в масле Camelina sativa. Промышленные культуры и продукты 15: 155–162.
16. 16.Peiretti PG, Mussa PP, Prola L, Meineri G (2007) Использование различных уровней семян ложного льна (Camelina sativa L.) в рационах для откорма кроликов. Животноводство 107: 192–198.
17. 17. Flachowsky G, Langbein T, Bohme H, Schneider A, Aulrich K (1998) Влияние вытеснителя ложного льна в сочетании с краткосрочным добавлением витамина E при кормлении свиней на структуру жирных кислот, концентрацию витамина E и окислительную стабильность различных тканей. Журнал физиологии животных и питания животных — Zeitschrift Fur Tierphysiologie Tierernahrung Und Futtermittelkunde 78: 187–195.
18. 18. Яскевич Т., Матыка С. (2003) Применение Camelina sativa, ее семян, экструдата и жмыха в рационах для цыплят-бройлеров и влияние на показатели выращивания и качество туши. Ann Anim Sci 3: 181–184.
19. 19. Meadus WJ, Duff P, McDonald T, Caine WR (2014) Свиньи, которых кормили едой из камелины, увеличивают экспрессию печеночного гена цитохрома 8b1, альдегиддегидрогеназы и тиосульфаттрансферазы. Журнал зоотехники и биотехнологии 5.
20. 20.Hurtaud C, Peyraud JL (2007) Влияние кормления камелиной (семенами или мукой) на состав жирных кислот молока и намазываемость масла. J Dairy Sci 90: 5134–5145.
21. 21. Тарану И., Марин Д.Е., Манда Дж., Мотиу М., Нягое И. и др. (2011) Оценка потенциала добавки бора и фруктозы в противодействии токсическому эффекту микотоксинов Fusarium. Британский журнал питания 106: 398–407.
22. 22. Марин Д.Е., Pistol GC, Neagoe IV, Calin L, Taranu I (2013) Влияние зеараленона на окислительный стресс и воспаление у поросят-отъемышей.Пищевая и химическая токсикология 58: 408–415.
23. 23. Meurens F, Berri M, Auray G, Melo S, Levast B и др. (2009) Ранний иммунный ответ после инфекции подвида Salmonella enterica enterica serovar Typhimurium в петлях кишечника тощей кишки свиней. Ветеринарные исследования 40.
24. 24. Pistol GC, Gras MA, Marin DE, Israel-Roming F, Stancu M и др. (2014) Зеараленон, загрязняющий природный корм, снижает экспрессию важных про- и противовоспалительных медиаторов и сигнальных молекул митоген-активируемой протеинкиназы / NF-kB у свиней.Британский журнал питания 111: 452–464.
25. 25. Rahman MM, Mohamed MR, Kim M, Smallwood S, McFadden G (2009) Совместная регуляция NF-kappaB и воспалительных реакций, опосредованных инфламмасомами, с помощью белка M013, содержащего пириновый домен вируса миксомы. PLoS Pathog 5: e1000635.
26. 26. Мориэль П., Найигихугу В., Каппеллоцца Б.И., Гонсалвес Е.П., Кралл Дж. М. и др. (2011) Камелиновая мука и сырой глицерин в качестве кормовых добавок для выращивания ремонтных телок. J Anim Sci 89: 4314–4324.
27. 27. Паскуаль СП, Рафекас М., Канела М.А., Боателла Дж., Боу Р. и др. (2007) Влияние увеличения количества пищевых жиров, богатых линолевой кислотой, на жировой состав четырех пород свиней. Часть II: Состав жирных кислот в мышечной и жировой тканях. Food Chem 100: 1639–1648.
28. 28. Де ла Ллата М., Дритц С.С., Токач М.Д., Гудбанд Р.Д., Нельсен Дж. Л. и др. (2001) Влияние диетического жира на показатели роста и характеристики туши свиней, выращиваемых в промышленных условиях.J Anim Sci 79: 2643–2650.
29. 29. Тей Г.А., Шеард П.Р., Уиттингтон Ф.М., Нут Г.Р., Стюарт А. и др. (2006) Влияние диетических масел и уровня белка на качество свинины. 1. Влияние на состав жирных кислот в мышцах, тушу, мясо и вкусовые качества. Meat Sci 73: 157–165.
30. 30. Ю ЙХ, Ву С.К., Ченг В.Т., Мерсманн Х.Дж., Шен Т.Л. и др. (2011) Влияние PPARgamma свиньи и диетического рыбьего жира на экспрессию генов, связанных с метаболизмом липидов и глюкозы.J Nutr Biochem 22: 179–186.
31. 31. Burri L, Berge K, Wibrand K, Berge RK, Barger JL (2011) Дифференциальные эффекты масла криля и рыбьего жира на печеночный транскриптом у мышей. Фронт Genet 2: 45.
32. 32. Sharma AM, Staels B (2007) Обзор: гамма-рецептор, активируемый пролифератором пероксисом, и жировая ткань — понимание связанных с ожирением изменений в регуляции метаболизма липидов и глюкозы. J Clin Endocrinol Metab 92: 386–395.
33. 33. Луис Л., Талтавулл Н., Муньос-Кортес М., Санчес-Мартос В., Ромеу М. и др.(2013) Защитный эффект полиненасыщенных жирных кислот омега-3: соотношение эйкозапентаеновая кислота / докозагексаеновая кислота 1: 1 на маркеры риска сердечно-сосудистых заболеваний у крыс. Lipids Health Dis 12: 140.
34. 34. de Castro GS, dos Santos RA, Portari GV, Jordao AA, Vannucchi H (2012) Омега-3 улучшает толерантность к глюкозе, но увеличивает перекисное окисление липидов и повреждение ДНК в гепатоцитах крыс, получавших фруктозу. Appl Physiol Nutr Metab 37: 233–240.
35. 35. Gaiva MH, Couto RC, Oyama LM, Couto GE, Silveira VL и др.(2003) Диеты, богатые полиненасыщенными жирными кислотами: влияние на метаболизм в печени у крыс. Питание 19: 144–149.
36. 36. Коста, Калифорния, Карлос А.С., душ Сантуш Аде С., Монтейро А.М., Моура Е.Г. и др. (2011) Абдоминальное ожирение, инсулин и качество костей у молодых самцов крыс, получавших диету с высоким содержанием жиров, содержащую соевое или рапсовое масло. Клиники (Сан-Паулу) 66: 1811–1816.
37. 37. Сливкофф-Кларк К.М., Джеймс А.П., Мамо Дж.С. (2012) Хронические эффекты рыбьего жира с упражнениями на постпрандиальную липемию и гомеостаз хиломикронов у инсулинорезистентных мужчин с висцеральным ожирением.Нутр Метаб (Лондон) 9: 9.
38. 38. Woodman RJ, Mori TA, Burke V, Puddey IB, Watts GF и др. (2002) Влияние очищенной эйкозапентаеновой и докозагексаеновой кислот на гликемический контроль, артериальное давление и липиды сыворотки крови у пациентов с сахарным диабетом 2 типа, леченных гипертонией. Am J Clin Nutr 76: 1007–1015.
39. 39. Peairs AD, Rankin JW, Lee YW (2011) Влияние острого употребления различных жиров на окислительный стресс и воспаление у взрослых с избыточным весом и ожирением.Nutr J 10: 122.
40. 40. Хаджианфар Х., Хоссейнзаде М.Дж., Бахонар А., Мохаммад К., Аскари Г.Р. и др. (2011) Влияние омега-3 на концентрацию висфатина в сыворотке крови у пациентов с диабетом II типа. J Res Med Sci 16: 490–495.
41. 41. Мори Т.А., Бао Д.К., Берк В., Падди И.Б., Уоттс Г.Ф. и др. (1999) Диетическая рыба как основной компонент диеты для похудания: влияние на липиды сыворотки, глюкозу и метаболизм инсулина у субъектов с избыточным весом и гипертонией. Am J Clin Nutr 70: 817–825.
42. 42. Балк Э.М., Лихтенштейн А.Х., Чанг М., Купельник Б., Чу П. и др. (2006) Эффекты омега-3 жирных кислот на сывороточные маркеры риска сердечно-сосудистых заболеваний: систематический обзор. Атеросклероз 189: 19–30.
43. 43. Gillingham LG, Gustafson JA, Han SY, Jassal DS, Jones PJH (2011) Высокоолеиновые масла рапса (канолы) и льняного семени модулируют липиды сыворотки и воспалительные биомаркеры у субъектов с гиперхолестеринемией. Британский журнал питания 105: 417–427.
44. 44.Simopoulos AP (2002) Омега-3 жирные кислоты при воспалении и аутоиммунных заболеваниях. J Am Coll Nutr 21: 495–505.
45. 45. Caughey GE, Mantzioris E, Gibson RA, Cleland LG, James MJ (1996) Влияние на выработку фактора некроза опухоли альфа и интерлейкина 1 бета рационов, обогащенных n-3 жирными кислотами из растительного масла или рыбьего жира. Am J Clin Nutr 63: 116–22.
46. 46. Sokołowska M, Kowalski ML, Pawliczak R (2005) Рецепторы-γ, активируемые пролифератором пероксисом (PPAR-γ), и их роль в иммунорегуляции и контроле воспаления.Postępy Higieny i Mediciny Doświadczalnej 59: 472–484 Доступно: http://www.phmd.pl/fulltxt Проверено 10 апреля 2005 г. 47. Debril MB, Renaud JP, Fajas L, Auwerx J (2001) Плейотропные функции гамма-рецептора, активируемого пролифератором пероксисом. Журнал молекулярной медицины-Jmm 79: 30–47 ..
47. 47. Debril MB, Renaud JP, Fajas L, Auwerx J (2001) Плейотропные функции гамма-рецептора, активируемого пролифератором пероксизом. Ж. Мол Мед (Берл) 79: 30–47.
48. 48. Джудетти AM, Cagnazzo R (2012) Благоприятные эффекты n-3 ПНЖК при хронических воспалительных заболеваниях дыхательных путей.Простагландины Other Lipid Mediat 99: 57–67.
49. 49. Xu JH, Christian B, Jump DB (2006) Регулирование состава и активности промотора L-пируваткиназы печени крысы с помощью глюкозы, n-3 полиненасыщенных жирных кислот и агониста рецептора-альфа, активируемого пролифератором пероксисом. Журнал биологической химии 281: 18351–18362.
50. 50. Дентин Р., Бенхамед Ф., Пегорье Дж. П., Фуфель Ф., Виоллет Б. и др. (2005) Полиненасыщенные жирные кислоты подавляют гликолитические и липогенные гены за счет ингибирования транслокации ядерного белка ChREBP.Журнал клинических исследований 115: 2843–2854.
51. 51. Jia Y, Turek JJ (2005) Измененная экспрессия гена NF-каппа B и образование коллагена, индуцированные полиненасыщенными жирными кислотами. Журнал пищевой биохимии 16: 500–506.
52. 52. Mayyas F, Sakurai S, Ram R, Rennison JH, Hwang ES и др. (2011) Диетические жирные кислоты омега-3 модулируют субстрат для послеоперационной фибрилляции предсердий в модели кардиохирургии собак. Cardiovasc Res 89: 852–861.
53. 53.Шимодзё Н., Джесмин С., Заеди С., Сома М., Кобаяши Т. и др. (2006) Влияние EPA на экспрессию гена NOS и уровень NO в гипертрофированных кардиомиоцитах, вызванных эндотелином-1. Экспериментальная биология и медицина 231: 913–918.
54. 54. Blazovics A, Szentmihalyi K, Vinkler P, Kovacs A (2004) Передозировка Zn может вызвать нарушение метаболизма железа при неактивных воспалительных заболеваниях кишечника. Микроэлементы и электролиты 21: 240–247.
55. 55. Priante G, Musacchio E, Pagnin E, Calo LA, Baggio B (2005) Специфический эффект арахидоновой кислоты на экспрессию мРНК индуцибельной синтазы оксида азота в остеобластических клетках человека.Клиническая наука 109: 177–182.
56. 56. LaLone CA, Huang N, Rizshsky L, Yum MY, Singh N и др. (2010) Обогащение Echinacea angustifolia с помощью Bauer Alkylamide 11 и Bauer Ketone 23 увеличило противовоспалительный потенциал за счет вмешательства в активность фермента COX-2. J. Agric Food Chem. 58: 8573–8584.
57. 57. Аврамович Н., Драгутинович В., Крстич Д., Колович М.Б., Трбович А. и др. (2012) Влияние добавок омега-3 жирных кислот на окислительный статус мозговой ткани у старых крыс линии Вистар.Гиппократия 16: 241–245.
58. 58. Lionetti L, Cavaliere G, Bergamo P, Trinchese G, De Filippo C и др. (2012) Добавка к диете с ослиным молоком активизирует разобщение митохондрий печени, снижает энергоэффективность и улучшает антиоксидантную и противовоспалительную защиту у крыс. Mol Nutr Food Res 56: 1596–1600.
59. 59. Ромье И., Гарсия-Эстебан Р., Суньер Дж., Риос К., Акараз-Зубельдиа М. и др. (2008) Влияние добавок с полиненасыщенными жирными кислотами омега-3 на маркеры окислительного стресса у пожилых людей, подвергшихся воздействию PM (2.5). Environ Health Perspect 116: 1237–1242.
60. 60. La Marca M, Beffy P, Pugliese A, Longo V (2013) Порошок ферментированной пшеницы индуцирует антиоксидантную и детоксицирующую системы в первичных гепатоцитах крысы. PLoS One 8.
61. 61. Ито К., Чиба Т., Такахаши С., Исии Т., Игараси К. и др. (1997) Малый гетеродимер Maf Nrf2 опосредует индукцию генов детоксицирующих ферментов фазы II через элементы антиоксидантного ответа. Biochem Biophys Res Commun 236: 313–322.
62. 62.Lu H, Cui W, Klaassen CD (2011) Nrf2 защищает от оксидативного повреждения, вызванного 2,3,7,8-тетрахлордибензо-п-диоксином (TCDD), и стеатогепатита. Toxicol Appl Pharmacol 256: 122–135.
63. 63. Wakabayashi N, Slocum SL, Skoko JJ, Shin S, Kensler TW (2010) Когда NRF2 говорит, кто слушает? Антиоксидный окислительно-восстановительный сигнал 13: 1649–1663.
64. 64. Batumalaie K, Safi SZ, Yusof KM, Ismail IS, Sekaran SD, et al .. (2013) Влияние геламного меда на индуцированные окислительным стрессом сигнальные пути в клетках поджелудочной железы хомяка.Международный журнал эндокринологии.
65. 65. Abdo S, Shi Y, Otoukesh A, Ghosh A, Lo C-S, et al .. (2014) Сверхэкспрессия каталазы предотвращает стимуляцию фактора 2, связанного с ядерным фактором, эритроидом 2, экспрессии гена почечного ангиотензиногена, гипертонии и почечной недостаточности у мышей с диабетом. Сахарный диабет.
66. 66. Atkinson HAC, Maisey J (1995) Влияние высоких уровней диетических масел на аутоиммунные реакции. Biochem Soc Trans 23: S277 – S277.
67. 67. Virella G, Fourspring K, Hyman B, Haskillstroud R, Long L и др.(1991) Иммуносупрессивные эффекты рыбьего жира у нормальных добровольцев — корреляция с эффектами Invitro эйкозапентановой кислоты на лимфоциты человека. Clin Immunol Immunopathol 61: 161–176.
68. 68. Chang HH, Chen CS, Lin JY (2009) Диетическое масло периллы снижает уровень липидов сыворотки и овальбумин-специфический IgG1, но увеличивает общий уровень IgE у мышей, зараженных овальбумином. Пищевая и химическая токсикология 47: 848–854.
69. 69. Grenier B, Bracarense AP, Schwartz HE, Trumel C, Cossalter AM и др.(2012) Низкая кишечная и печеночная токсичность гидролизованного фумонизина B1 коррелирует с его неспособностью изменять метаболизм сфинголипидов. Biochem Pharmacol 83: 1465–1473.
70. 70. Royaee AR, Husmann RJ, Dawson HD, Calzada-Nova G, Schnitzlein WM и др. (2004) Расшифровка участия факторов врожденного иммунитета в развитии ответа хозяина на вакцинацию против вируса РРСС. Vet Immunol Immunopathol 102: 199–216.
71. 71. Меуренс Ф., Берри М., Орей Дж., Мело С., Леваст Б. и др.(2009) Ранний иммунный ответ после инфекции Salmonella enterica подвидов enterica серовара Typhimurium в петлях тонкой кишки свиней. Vet Res 40: 1–5.
72. 72. Jiang SZ, Yang ZB, Yang WR, Yao BQ, Zhao H, et al. (2010) Влияние кормления рационов, загрязненных очищенным зеараленоном, с глинистым энтеросорбентом или без него на рост, доступность питательных веществ и половые органы у самок свиней после отъема. Азиатско-австрийский журнал J Anim Sci 23: 74–81.
73. 73. Бломберг Л.А., Лон Э.Л., Сонстегард Т.С., Ван Тасселл С.П., Добринский Д.Р. и др.(2005) Серийный анализ экспрессии генов во время удлинения периимплантационной трофэктодермы свиньи (conceptus). Physiol Genomics 20: 188–194.
74. 74. Юнг Б.Х., Стайс, Бек Э., Кабрал Дж., Чау Э и др. (2007) Рецептор активина типа 2 Восстановление при раке толстой кишки MSI-H подавляет рост и усиливает миграцию с помощью активина. Гастроэнтерология 132: 633–644.
75. 75. Hostetler CE, Michal J, Robison M, Ott TL, Kincaid RL (2006) Влияние потребления селена и возраста плода на уровни мРНК двух селенопротеинов в печени плода и матери свиньи.J Anim Sci 84: 2382–2390.
76. 76. Primer 3. Доступно: http://frodo.wi.mit.edu/cgi-bin/primer3/primer3_www.cgi.
77. 77. Гесслейн Б., Хаканссон Г., Карпио Р., Густафссон Л., Перес М.Т. и др. (2010) Митоген активировал протеинкиназы в артериях сетчатки и нейроретина свиней после ишемии-реперфузии сетчатки. Мол Вис 16: 392–407.
78. 78. Chatelais L, Jamin A, Gras-Le Guen C, Lallès J-P, Le Huërou-Luron I, et al .. (2011) Уровень белка в молочной смеси изменяет чувствительность подвздошной кишки к LPS в более позднем возрасте на модели поросенка.PLoS One 6: e19594. Доступно: http: // www. 10.1371 / journal.pone.0019594 Проверено 9 мая 2011 г.
79. 79. Devriendt B, Gallois M, Verdonck F, Wache Y, Bimczok D и др. (2009) Загрязняющий пищу фумонизин B1 снижает созревание свиных CD11R1 + кишечных антиген-презентирующих клеток и антиген-специфические иммунные ответы, что приводит к длительной кишечной инфекции ETEC. Vet Res 40: 40.
80. 80. Hyland KA, Brown DR, Murtaugh MP (2006) Инфекция Salmonella enterica serovar Choleraesuis свиной Jejuna Пейерз-патч быстро индуцирует экспрессию IL-1beta и IL-8.Вет Иммунол Иммунопатол 109: 1–11.

Заманчивое новое масло для жарки с серьезной пользой для здоровья